肿瘤抑素相关肽T42肽的纯化及抗肝癌细胞Hepg2活性的测定

摘要

目的:利用已成功构建的肿瘤抑素相关活性肽T42肽高效表达基因工程重组菌pTYB2-T42,提取纯化T42肽,检测其抗肿瘤活性,为研究T42肽抗肿瘤作用机制及新型抗肿瘤药物研发提供实验基础.方法:将pTYB2-T42大肠杆菌进行培养,IPTG诱导其产生融合蛋白,经几丁质柱亲和层析得剑目的蛋白,葡聚糖凝胶G15去除DTT干扰,Tricine SDS-PAGE鉴定T42肽,紫外分光光度法检测其浓度.MTT检测T42肽对细胞的生长增殖抑制作用,AO/EB荧光染色检测细胞凋亡形态学变化.结果:提取的T42肽其相对分子质量在5 000左右,与理论值4 600一致.MTT实验结果显示:T42肽作用下Hepg2细胞生长增殖受到抑制,且随着T42肽浓度的增加,Hepg2细胞存活率逐渐下降,其半数抑制浓度(IC_(50))为30 mmol·L~(-1);AO/EB荧光染色结果表明:经过30 mmol·L~(-1) T42肽作用24 h后的Hepg2细胞表现出细胞皱缩呈圆形或卵圆形,核皱缩变形且胞膜受损等一系列细胞凋亡特征性的形态变化.结论:T42肽具有显著的抗肿瘤细胞活性,可明显抑制人肝癌细胞Hepg2的生长增殖,并促进其凋亡.