巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其亚型

摘要

目的:建立一种检测结核分枝杆菌及其亚型的PCR方法。方法:根据人型及牛型结核分枝杆菌硝酸还原酶(nitrate reductase,nar GHJI)基因启动子区215位上T-C的转换,设计巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其亚型,测定其敏感性,并用琼脂糖凝胶电泳验证观察巢式荧光PCR产物的特异性。以人型结核杆菌标准株(H37Ra)、卡介苗培养菌液、人型临床分离株和牛型临床分离株为标本,高分辨熔链曲线分析结核分枝杆菌亚型正态化熔链曲线及熔链温度。结果:巢式荧光PCR特异性地检出结核分枝杆菌nar GHJI基因,其敏感性比荧光定量PCR高10倍左右;人型及牛型结核分枝杆菌nar GHJI基因PCR产物的高分辨熔链曲线分成2个不同组合,熔链温度分别为(83.08±0.08)℃和(83.96±0.09)℃,差异有统计学意义(t=217.23,P<0.05)。结论:成功建立检测结核分枝杆菌及其亚型的巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线法。