荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药情况的研究

摘要

目的评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)探针熔解曲线法(简称"熔解曲线法")检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药的情况。方法对832例涂阳肺结核患者的痰标本进行BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960")液体培养,结果显示污染35例,培养阴性52例,培养阳性745例,对培养阳性的745份培养物进行菌种鉴定(基因芯片法),其中混合感染7例,非结核分枝杆菌60例,结核分枝杆菌复合群678例;对鉴定为结核分枝杆菌复合群的678例患者标本采用MGIT 960液体培养药物敏感性试验(简称"MGIT 960药敏试验")和熔解曲线法进行利福平和异烟肼耐药基因检测。熔解曲线法检测对利福平是否耐药的结果无效(无法判断是否耐药)31例,检测对异烟肼是否耐药的结果无效34例,剩余639例利福平和异烟肼同时检测结果有效。以MGIT 960液体药敏试验为参考标准,分析熔解曲线法检测耐药基因的效果。结果以MGIT 960液体药敏试验结果为参考标准,639例患者的样本进行利福平和异烟肼熔解曲线法耐药性检测,对利福平耐药性检测的符合率为96.2%(615/639),敏感度和特异度分别为93.3%(126/135)和97.0%(489/504),阳性预测值和阴性预测值分别为89.4%(126/141)和98.2%(489/498),Kappa值为0.89;对异烟肼耐药性检测的符合率为93.6%(598/639),敏感度和特异度分别为83.1%(157/189)和98.0%(441/450),阳性预测值和阴性预测值分别为94.6%(157/166)和93.2%(441/473),Kappa值为0.84。结论熔解曲线法对利福平和异烟肼耐药性检测的敏感度高、特异度好,对于早期诊断耐药肺结核有较好的临床意义。