DC 荷载α-GalCer 联合肿瘤特异性 CTL对小鼠 Heps 肝癌移植瘤生长的影响

摘要

目的：探讨树突状细胞（DC）荷载α-半乳糖神经酰胺（α-GalCer）联合肿瘤特异性细胞毒T 淋巴细胞（CTL）对小鼠 Heps 肝癌移植瘤生长的影响。方法诱导扩增小鼠骨髓来源的 DC 细胞和 T淋巴细胞，使其成为具有肿瘤特异性的 CTL；DC 细胞体外荷载α-GalCer。建立 Heps 肝癌移植瘤模型，采用随机数字表法将模型鼠分为4组（n ＝9）：对照组（静脉给予生理盐水）、CTL 组、DC 荷载α-GalCer组、DC 细胞荷载α-GalCer 联合 CTL 组。干预2周后取肿瘤组织，称取各瘤体重量，计算抑瘤率。免疫组织化学法和 Western blotting 检测各组移植瘤组织内 Bax 和 Bcl-2的表达水平。结果 CTL 组、DC 荷载α-GalCer 组和联合治疗组的平均瘤重分别为（1．07±0．15）g、（1．11±0．17）g、（0．79±0．14）g，均低于对照组（1．69±0．23）g，差异有统计学意义（t ＝14．176，P ＝0．023；t ＝12．351，P ＝0．034；t ＝18．672，P ＝0．000）。联合治疗组的平均瘤重低于 CTL 组及 DC 荷载α-GalCer 组，差异有统计学意义（t ＝15．236，P ＝0．012；t ＝11．176，P ＝0．037）。联合治疗组（53．25％）的抑瘤率高于 CTL 组（36．69％）和 DC 荷载α-GalCer组（34．32％），差异有统计学意义（P ＝0．034；P ＝0．021）。免疫组织化学检测发现，CTL 组、DC荷载α-GalCer 组及联合治疗组移植瘤内 Bax 阳性细胞数量分别为35．83±0．75、33．67±0．82、41．17±1．17，与对照组（21．67±2．16）相比，差异有统计学意义（t ＝－13．789，P ＝0．002；t ＝－15．116，P ＝0．001；t ＝－17．452，P ＝0．000）；联合治疗组移植瘤内 Bax 阳性细胞数与 CTL 组和 DC 荷载α-GalCer 组相比，差异有统计学意义（t ＝－7．730，P ＝0．009；t ＝－5．872，P ＝0．011）。CTL 组、DC 荷载α-GalCer 组及联合治疗组移植瘤内 Bcl-2阳性细胞数量分别为30．83±0．75、31．67±1．03、25．00±0．89，与对照组相比（38．67±1．21），差异有统计学意义（t ＝9．234，P ＝0．007；t ＝11．738，P ＝0．003；t ＝20．608，P ＝0．000）；联合治疗组移植瘤内 Bcl-2阳性细胞数与 CTL 组和 DC 荷载α-GalCer 组相比，差异有统计学意义（t ＝11．952，P ＝0．003；t ＝12．223，P ＝0．002）。Western boltting 检测结果显示 CTL 组、DC 荷载α-Gal-Cer 组和联合治疗组移植瘤内 Bax 的表达水平分别为0．46±0．01、0．42±0．03、0．55±0．01，与对照组（0．31±0．02）相比，差异有统计学意义（t ＝1．035，P ＝0．032；t ＝1．124，P ＝0．027；t ＝1．425，P ＝0．010）；联合治疗组移植瘤内 Bax 表达水平与 CTL 组和 DC 荷载α-GalCer 组相比，差异有统计学意义（t ＝1．305，P ＝0．013；t ＝1．421，P ＝0．010）。CTL 组、DC 荷载α-GalCer 组和联合治疗组移植瘤内 Bcl-2的表达水平分别为0．34±0．03、0．33±0．02、0．24±0．01，与对照组相比（0．46±0．01），差异有统计学意义（t ＝－1．123，P ＝0．025；t ＝－1．061，P ＝0．031；t ＝1．278，P ＝0．014）；联合治疗组移植瘤内 Bcl-2阳性细胞与 CTL 组和 DC 荷载α-GalCer 组相比，差异有统计学意义（t ＝1．160，P ＝0．021；t ＝1．219，P ＝0．015）。结论 DC 荷载α-GalCer 与肿瘤特异性 CTL 联合应用对小鼠 Heps 肝癌移植瘤具有协同杀伤作用。