海马神经元原代细胞培养方法的改良

摘要

目的:旨在建立一种简单、稳定的SD乳鼠海马神经元的分离及原代培养方法。方法:选用出生24 h内的SD乳鼠,在数码显微镜下分离双侧海马体,剥离去除海马体上的包膜血管,剪碎吹打海马组织、胰酶消化后,获得细胞悬液,用含胎牛血清的DMEM高糖型种植培养基培养8 h后,再用添加B27的Neuralbasal维持型培养基行原代培养,第7天采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色鉴定神经元纯度,CCK-8法检测海马神经元细胞活力。结果:提取的海马神经元细胞形态完整,胶质细胞少,基本无杂质,生长状态良好,胞体丰满,培养的海马神经元之间能形成密集的网络结构;NSE免疫组化鉴定培养的海马神经元纯度达90%,CCK8显示培养第1~6天培养的海马神经元活性逐渐增强,第7天达峰值。结论:本方法能够提高海马神经元细胞纯度以及细胞活性,是一种稳定高效的海马神经元原代培养方法。