以GFP为标记的肝癌细胞RNA转染树突状细胞的体外效应

摘要

目的:探讨GFP作为标记观察肝癌细胞RNA转染DCs效果的可行性及肿瘤细胞RNA转染DCs制备疫苗的可行性. 方法:绿色荧光蛋白质粒载体 pGFP-C3稳定转染肝癌细胞HepG2,Trizol法提取筛选后细胞HepG2-GFP总RNA;分离肝癌患者外周血单核细胞体外诱导DCs细胞,总RNA转染DCs,荧光显微镜下观察转染效果,流式细胞仪检测转染前后DCs表型变化;ELISA法检测转染前后上清中IL-12变化情况;MTT法检测效应细胞对靶细胞的杀伤率. 结果:pGFP-C3稳定转染肝癌细胞HepG2后可得到稳定表达GFP的细胞HepG2-GFP,荧光显微镜下呈绿色荧光;总RNA转染的DCs荧光显微镜下呈绿色荧光,CD80(13.2%上升至86.7%),HLA-DR(38.9%上升至97.9%),CD83(0.9%上升至97.1%),CD86(31.2%上升至92.5%)表达明显升高,上清IL-12分泌量ng/L显著增高(61.3±8.1→287.4±29.3,P＜0.05);诱导的CTL能够对肝癌细胞株HepG2起特异性杀伤作用. 结论:GFP可以作为肿瘤细胞RNA转染树突状细胞的观察标记,肿瘤细胞RNA转染DCs可作为一种有效的肿瘤疫苗.