AS203逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因甲基化状态及激活转录的实验研究

摘要

本研究旨在探讨三氧化二砷(AS2O3)逆转恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因甲基化状态和调节转录作用及其可能的机制.以高甲基化的恶性淋巴瘤细胞株CA46作为研究基因甲基化与表达关系的实验对象.采用SRB法检测AS2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力的影响;nMSP法检测药物作用后p16甲基化状态变化;RT-PCR法检测p16、甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达;利用流式细胞术DNA倍体分析法探讨AS2O3,对恶性淋巴瘤细胞周期的影响.结果表明:①AS2O3作用CA46细胞株72小时后p16基因甲基化程度明显减弱,p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因呈微弱表达,AS2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5 μmol/L组、1.0μmol/L组和2.0μmol/L组p16基因表达阳性条带与β-actin灰度的比值分别为(0.33±0.10)、(0.57±0.11)、(0.67±0.09),阳性对照灰度比值为(0.73±0.13),差异有统计学意义(p<0.01);③与未处理组相比,AS2O3作用72小时后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性,而DNMTI表达不受影响;④与对照组相比,3组不同浓度AS2O3均能明显抑制肿瘤细胞生长,G0/G1期细胞增加.结论:AS2O3可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B或(和)直接逆转p16基因甲基化状态,使p16基因表达上调,并恢复其活性,从而实现其细胞周期调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞的增长.