壳聚糖转运针对TNFαsiRNA的可行性及其对于炎症因子抑制效应的初步研究

摘要

目的：初步探索壳聚糖／siRNA纳米颗粒应用于炎症性肠病的可行性。方法：应用直接混合法将壳聚糖溶液与siRNA按照N／P比为60混合形成壳聚糖／siRNA纳米颗粒，采用Zetasizer粒度仪对纳米颗粒直径进行检测，扫描电镜观察其形态以及透射电镜观察其结构；将纳米粒与RNA酶孵育后采用2％琼脂糖凝胶电泳分析其保护作用；采用细菌脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）对小鼠巨噬细胞系RAW264．7进行炎症因子诱导后进行体外实验，荧光显微镜观察其转染效率，采用针对TNFα的siRNA进行转染，TaqMan荧光定量PCR和ELISA对TNFα的表达进行定量分析；利用MTT方法对转染后的细胞进行活力测试。结果：壳聚糖／siRNA纳米粒形态较为均一，粒径在200nm左右；壳聚糖能够与siRNA形成可逆性结合，保护siRNA不被酶降解长达120min以上；该纳米粒能够高效率的实现对巨噬细胞的转染；纳米粒转染后对LPS诱导巨噬细胞分泌大量的TNFα起到显著的抑制作用，效率高达50％以上，且细胞活性没有明显改变。结论：壳聚糖／siRNA纳米粒系统能够有效的转染巨噬细胞，实现对炎症因子TNFα的抑制作用，为炎症性肠病的分子治疗提供了一定的参考价值。