针对小胶质细胞上BDNF表达的siRNA筛选及其抑制效应检测

摘要

目的 筛选有效抑制小胶质细胞上脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)序列,并观察其对小胶质细胞活性标记物OX-42表达的调节作用.方法 设计并合成针对BDNF的siRNA 3对(siRNA1588,siRNA283,siRNA232)及一条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA.在LipofectamineTM 2000介导下转染小胶质细胞.分别采用Real-Time PCR及Western blot方法测定并比较其抑制率;采用磺基罗丹明B法(sulforhodamine B,SRB)分析转染复合物的细胞毒性.同时采用免疫荧光组织化学结合共聚焦显微镜观察BDNF和OX-42的表达情况.结果 ①与阴性对照组及siRNA283、siRNA232相比,BDNF siRNA1588(50 μmol·L-1,脂质体与siRNA比例1 ∶ 3)干扰小胶质细胞后,其mRNA和蛋白的相对表达量最低(P<0.01).② LipofectamineTM 2000 8 μl复合50 μmol·L-1 siRNA(脂质体与siRNA比例为1 ∶ 3),不仅细胞毒性低而且转染效率高(P<0.01),为最佳转染条件.③ BNDF和OX-42存在共表达;且siRNA1588作用后OX-42的平均光密度值(IOD/area)明显降低(P<0.01).结论 ① siRNA1588对小胶质细胞上BDNF表达的抑制效果最大.② BDNF在小胶质细胞的活性调节中具有重要作用.