金黄色葡萄球菌FnBP配体结合区基因的克隆及其原核表达

摘要

[目的]克隆金黄色葡萄球菌FnBP配体结合区基因,并构建原核表达载体,进行原核表达.[方法]设计引物,采用PCR方法扩增FnBP配体结合区基因,T-A克隆后,构建了克隆质粒pMD18-FnBP.用BamH I和EcoR I双酶切pMD18-FnBP和pET28a(+),将纯化的基因FnBP亚克隆至pET28a(+),构建重组表达质粒pET28a-FnBP,并将其转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,并对表达产物进行分析. [结果]PCR扩增出1条约370 bp的目的片段,表达产物经SDS-PAGE分析,在30 kDa处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带,Western blot分析表明该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性.[结论]已成功构建了FnBP配体结合区基因,并在原核细胞中表达.