影响人类胚胎生殖细胞分离克隆的因素

摘要

探讨胚龄培养液、细胞因子、饲养层细胞等因素对人类胚胎生殖细胞分离克隆的影响.以4～13周龄流产胎儿生殖嵴或性腺为材料,小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)、人胎儿成纤维细胞(hEF)、STO细胞和牛胎儿成纤维细胞(bEF)作饲养层,高糖DMEM(Dulbecco's minimum Eagle's medium)为基础培养液,添加104 m01/L 2Me(2-巯基乙醇)、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、白血病抑制因子(LIF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、干细胞因子(SCF)等为培养液,探讨影响人类胚胎生殖细胞分离克隆的因素.结果表明7～12周流产儿适于人类胚胎生殖细胞的分离克隆;人类胚胎生殖细胞体外培养以添加15%FBS为宜;添加4 ng/mL LIF+4 ng/mL bFGF+20 ng/mL SCF能明显改善人类胚胎生殖细胞的分离克隆;MEF、STO、bEF和hEF可提高人原始生殖细胞(PGCs)的贴壁率,能促进PGCs源的人类胚胎干细胞(ES)的分离效率;以MEF作为饲养层效果较好.