影响牛胚胎干细胞分离与克隆效率的因素

摘要

以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响,结果表明,在24 h内使小鼠胚胎贴壁率达86％以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离;在ES细胞分离与克隆中,犊牛血清浓度以15％-20％为宜,在DMEM(L)培养基中添加0.1 μMNa2SeO3+0.1 nMβ-巯基乙醇+10 ng/ml IGD+1000 IU/ml LIF,能显著提高牛ES细胞分离与克隆效率;在TCM199,DMEM(高糖)和DMEM(低糖)3种培养基中,低糖DMEM更适宜于牛ES细胞的分离,优秀胚胎形成的团状ICM更适宜于分离与克隆ES细胞,在37℃用低浓度消化液处理ICM或ES细胞集落,再以机械将其离散为细胞小块,ES细胞克隆效率最高.