影响山羊类胚胎干细胞分离克隆的因素分析

摘要

将本地槐山羊胎儿的原始生殖细胞（PGCs）与其生殖嵴周围组织细胞共同分离，经传代培养后获得了具有干细胞特征的山羊类ES细胞。结果表明：高糖DMEM培养基和低糖DMEM培养基相比较，低糖DMEM更适宜于山羊类ES细胞的分离与克隆；类ES细胞在山羊胎儿成纤维细胞饲养层上生长效果较好，可传4代或5代，而在小鼠成纤维细胞饲养层上，类ES细胞仅传3代；联合添加白血病抑制因子（LIF）、干细胞因子（SCF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）能显著提高山羊类ES细胞分离与克隆的效率；胎龄为30～45d的胎儿原代培养时可获得大量的细胞集落，克隆培养可传至5代，适合作山羊类ES细胞的分离培养。