牛γ-干扰素在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达及抗病毒活性比较

摘要

用RT-PCR从经ConA刺激的荷斯坦奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增了BoIFN-γ基因,克隆入pGEMT-easy载体测序.再亚克隆其成熟肽基因,分别构建大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET28a/BoIFN-γ和毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPICZα/BoIFN-γ.前者在E.coliBL21中经IPTG诱导实现了高效表达,表达蛋白占菌体总蛋白的30%,表达产物以包涵体形式存;后者在P.pastorisGS115中经甲醇诱导实现了高效分泌表达,表达产物直接分泌到培养上清中,表达量约为1.0 g/L.分别在CEF/VSV和MDBK/VSV细胞系上对2种表达蛋白的抗病毒活性进行了比较,结果表明,两种重组蛋白在MDBK/VSV抗病毒活性高于在CEF/VSV上的活性,而毕赤酵母表达的蛋白抗病毒活性高于大肠杆表达蛋白,约为前者的2倍.