小鼠胚胎干细胞体外定向诱导分化成骨细胞

摘要

将小鼠5 d龄ES-D3细胞源的类胚体(EBs)单细胞,按5×104/mL接种6孔细胞培养板,在DMEM基础培养基中使EBs单细胞贴壁培养.于第14～21天时,分别添加60%成骨细胞条件培养液(A组)、50μg/mL维生素C+50 mmol/L β-磷酸甘油(B组)和50μg/mL维生素C+50mmol/L β-磷酸甘油+1 μmol/L地塞米松(C组),并设不添加诱导剂对照组(D组).第22天时用1%茜素红染色显示阳性细胞,计算成骨细胞诱导形成率,数据用方差分析和多重比较检验.结果表明,A组细胞增殖呈团状聚集,茜素红染色阳性细胞结节多分布于聚集的细胞群内及其边缘,成骨细胞诱导形成率为10.04%,与对照组比较,差异极显著(P＜0.01);B组诱导分化的细胞分泌物形成网状结构,茜素红染色阳性细胞分布在这些网状结构中,成骨诱导形成率为7.43%,与对照组比较差异显著(P＜0.05);C组茜素红染色阳性细胞分散而均匀,但未出现网状结构,成骨细胞诱导形成率提高至27.57%,与对照组比较差异极显著(P＜0.01).