脂质体介导pAcGFP-bFADD重组质粒转染Hela细胞条件的优化

摘要

用脂质体lipofectamine 2000介导携带有AcGFP报告基因的pAcGFP-bFADD质粒转染Hela细胞,并通过调整质粒DNA、脂质体的浓度及转染时间来优化转染条件,转染后12 h在荧光显微镜下计数阳性细胞,MTT法检测各转染条件下Hela细胞的活性.结果表明,将2.4μg的pAcGFP-bFADD质粒与3.0μL lipofectamine 2000制备转染复合物与Hela细胞作用6 h可以获得62.3%的转染效率,并且保持较高的细胞存活率(83%).当质粒DNA与脂质体的量增加至3.2μg和6.0μL时,转染复合物对细胞的毒性作用明显增强,对细胞的抑制率可达42.98%,与对照组相比,差异极显著(P<0.01);条件优化后AcGFP-bFADD融合基因于转染后72 h达到表达高峰,绿色荧光阳性细胞所占比率达到64%.