时间分辨荧光免疫分析法检测产志贺毒素大肠杆菌

摘要

目的 基于时间分辨荧光免疫分析技术,建立高灵敏性、高特异性的产志贺毒素Ⅱ(StxⅡ)大肠杆菌(STEC)全自动超微量检测方法.方法 以StxⅡ单克隆抗体S1D8包被96孔板,采用双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+标记StxⅡ单克隆抗体S2C4,以β-二酮体为主的增强液为发光增强系统.建立StxⅡ双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法,并其对特异性、检出限、健全性进行评估.结果 建立以StxⅡ为靶标的时间分辨荧光免疫法检测STEC法,检出限为0.023 μg/L,与产StxⅠ的STEC无交叉反应;平均回收率为98.95％,批内、批间CV分别为3.5％和4.7％.该方法灵敏性和特异性分别为100.0％和97.4％,阳性预测值和阴性预测值各是92.6％和100.0％,误诊率和漏诊率则分别是2.6％和0,假阳性率和假阴性率分别是2.6％和0.TRFIA检测StxⅡ毒素的诊断符合率为98.1％;约登系数为0.974,Kappa检验u系数为0.95.结论 StxⅡ时间分辨荧光免疫分析法灵敏度高、稳定性好,具有很好的临床应用前景.