产志贺毒素大肠杆菌的RPA-LF快速检测方法的建立

摘要

为建立一种快速检测产志贺毒素大肠杆菌的基于侧流层析的重组酶聚合酶扩增技术(RPA-LF)方法,以志贺毒素stx1和stx2基因序列为靶序列,设计了用于RPA-LF方法的特异性引物及探针,并对RPA-LF反应条件进行优化。结果显示,针对stx1和stx2基因的最佳反应温度分别为39℃和37℃,最佳反应时间分别为10 min和15 min。最佳反应条件下,stx1和stx2基因的最低检测限分别为1 pg和10 pg,灵敏度较高。该检测方法能够准确识别含stx1和/或stx2基因的大肠杆菌,且不与其他6种非目的病原菌发生交叉反应,表明本方法特异性良好。本研究建立的针对志贺毒素stx1和stx2基因的RPA-LF快速检测方法灵敏度和特异性较好,且检测时间短,结果直观可视。本试验为产志贺毒素大肠杆菌的筛选诊断和现场的快速检测开辟了一个新的途径。