产志贺毒素大肠杆菌O26多重双启动寡核苷酸引物-PCR检测方法的建立

摘要

为建立一种三重DPO-PCR方法用于食品样品中的产志贺毒素大肠杆菌O26的检测.以志贺毒素stx1和stx2、O抗原基因wzx O26特异性和实际检测效果,设计引物,构建三重DPO-PCR反应体系,进行特异性、灵敏度、模拟样品验证和实际样品验证.结果 表明,三对DPO引物对退火温度不敏感,在49～69℃之间均能发生扩增,且引物之间干扰较小,具有较高的特异性,除目的基因外非目标细菌均无扩增条带出现,纯菌灵敏度检测表明,三重DPO-PCR方法对O26的最低检测限为3.8× 103c fu/g.在模拟样品和实际样品中具有良好的检测效果.本研究基于DPO引物构建的三重DPO-PCR方法具有效率高,特异性强,不受退火温度限制等优点,可用于食品样品中产志贺毒素大肠杆菌O26的快速准确检测提供一种高效的辅助检测方法.