检测产志贺毒素大肠杆菌抗体的间接ELISA试剂盒的研制

摘要

本研究旨在研制一种以紧密素为检测靶标的间接ELISA技术,检测血清中产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxigenic Escherichia coli,STEC)的抗体水平.根据紧密素27个亚型的N端保守序列,体外表达390～543aa片段制备包被抗原,通过敏感性、特异性、重复性和稳定性实验,建立检测STEC的抗体的间接EIISA方法.经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度3 ng/ 孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-兔抗羊IgG、HRP-兔抗牛IgG的工作浓度均为1∶15000,5％脱脂奶封闭lh,底物作用时间10min,用于牛、羊疫苗抗体检测或者STEC大肠杆菌感染的监测.