S100A16蛋白多克隆抗体表达条件的优化

摘要

探索优化并构建S100A16原核表达载体、制备S100A16蛋白多克隆抗体的条件。试验方法为，将RT－PCR扩增得到的小鼠肝脏组织的S100A16基因克隆片段连接到带有His标签的原核表达载体pET－28a多克隆位点，并转化大肠杆菌BL21（DE3），用不同温度、不同浓度IPTG（异丙基－β－D－硫代半乳糖苷）诱导融合蛋白表达，通过亲和层析柱纯化获得纯化的蛋白质。经免疫动物得到His－S100A16抗血清，通过免疫亲和层析获得了具有高度特异性抗体，通过Western Blot和Elisa检测抗体的特异性和效价，结果表明，在温度25℃、IPTG浓度为0．2 mmol／L的条件下，可溶性蛋白的表达效果较好。