MiR-29a靶向调控瞬时受体电位通道家族4在睾丸缺血再灌注损伤中对GC-1细胞增殖及凋亡的影响及作用机制

摘要

目的 研究miR-29a通过靶向调控瞬时受体电位通道家族4(TRPV4)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 建立睾丸GC-1细胞缺氧复氧模型,RT-PCR检测不同复氧损伤时间点miR-29a和TRPV4的表达水平;分别采用MTT实验、流式细胞术检测转染miR-29a对GC-1细胞增殖和凋亡能力的变化;荧光素酶实验证实miR-29a和TRPV4的靶向关系,Western blot法测定转染miR-29a后细胞中TRPV4的蛋白表达水平.结果 miR-29a随着复氧损伤时间的增加,其表达显著降低,而TRPV4的表达明显增加;过表达miR-29a能显著促进GC-1细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡水平.沉默miR-29a可使GC-1细胞的增殖能力明显减弱,凋亡水平增加;荧光素酶报告实验表明TRPV4是miR-29a的下游靶基因.过表达miR-29a能明显抑制GC-1细胞的TRPV4表达,而沉默miR-29a能显著促进TRPV4表达.结论 MiR-29a可以通过靶向调控TRPV4来改变GC-1细胞的增殖和凋亡能力,从而影响睾丸IRI的发生发展.