miR-29a

摘要： 背景:2型糖尿病伴发心肌间质纤维化,虽然miR-29a密切调控TGF-β1/Smads途径,但有关该信号通路调控2型糖尿病心肌间质纤维化的相关研究尚鲜有报道.研究表明运动能改善2型糖尿病心肌纤维化.目的:探究不同方式运动对自发性2型糖尿病小鼠(KK-Ay小鼠)心肌纤维化的影响及miR-29a/TGF-β1途径在此过程中的分子调控作用.方法:24只10周龄SPF级雄性KK-Ay小鼠适应性喂养1周后,随机分为KK-Ay对照组(8只)、KK-Ay游泳组(8只)和KK-Ay跑台组(8只),8只10周龄C57BL/6J小鼠作为正常对照组(8只).KK-Ay小鼠进行高脂膳食,C57BL/6J小鼠喂以普通饲料.KK-Ay游泳组和KK-Ay跑台组小鼠分别利用游泳和跑台运动进行8周训练.结束后,取小鼠左心室室壁,利用Masson染色检测心肌纤维化程度变化;利用RT-PCR法检测心肌中相关因子mRNA表达;利用ELISA和Western-blotting分别检测心肌中相关因子蛋白水平和蛋白表达.实验方案经扬州大学体育学院动物实验伦理委员会批准,动物伦理编号为YZU-TYXY-31.结果 与结论:①与正常对照组相比,KK-Ay对照组小鼠心肌间质纤维化程度显著;心肌中miR-29a mRNA表达和蛋白水平均显著下降,且转化生长因子β1、Smad3、Smad4、Ⅰ型胶原的mRNA表达和p-Smad2、p-Smad3、p-Smad4蛋白表达均显著上调(P＜0.05或P＜0.01),转化生长因子β1和Ⅰ型胶原蛋白水平显著升高(P＜0.05或P＜0.01);②与KK-Ay对照组相比,KK-Ay游泳组小鼠心肌纤维化无显著性变化,心肌中转化生长因子β1 mRNA和蛋白水平、Smad4 mRNA表达显著下降(P＜0.05);KK-Ay跑台组小鼠心肌纤维化程度改善显著,心肌中miR-29a mRNA表达和蛋白水平均上升(P＜0.05),转化生长因子β1、Smad2、Smad3和Ⅰ型胶原mRNA表达及转化生长因子β1、Ⅰ型胶原蛋白水平显著下降(P＜0.05),p-Smad2、p-Smad3和p-Smad4蛋白表达显著下调(P＜0.05或P＜0.01);④结果说明,2型糖尿病小鼠心肌间质纤维化程度严重;跑台运动可通过上调2型糖尿病小鼠心肌中miR-29a来抑制TGF-β1/Smads途径进而改善心肌纤维化,但游泳运动效果不显著.

摘要： 背景:2型糖尿病伴发心肌间质纤维化,虽然miR-29a密切调控TGF-β1/Smads途径,但有关该信号通路调控2型糖尿病心肌间质纤维化的相关研究尚鲜有报道。研究表明运动能改善2型糖尿病心肌纤维化。目的:探究不同方式运动对自发性2型糖尿病小鼠(KK-Ay小鼠)心肌纤维化的影响及miR-29a/TGF-β1途径在此过程中的分子调控作用。方法:24只10周龄SPF级雄性KK-Ay小鼠适应性喂养1周后,随机分为KK-Ay对照组(8只)、KK-Ay游泳组(8只)和KK-Ay跑台组(8只),8只10周龄C57BL/6J小鼠作为正常对照组(8只)。KK-Ay小鼠进行高脂膳食,C57BL/6J小鼠喂以普通饲料。KK-Ay游泳组和KK-Ay跑台组小鼠分别利用游泳和跑台运动进行8周训练。结束后,取小鼠左心室室壁,利用Masson染色检测心肌纤维化程度变化;利用RT-PCR法检测心肌中相关因子mRNA表达;利用ELISA和Western-blotting分别检测心肌中相关因子蛋白水平和蛋白表达。实验方案经扬州大学体育学院动物实验伦理委员会批准,动物伦理编号为YZU-TYXY-31。结果与结论:①与正常对照组相比,KK-Ay对照组小鼠心肌间质纤维化程度显著;心肌中miR-29a mRNA表达和蛋白水平均显著下降,且转化生长因子β1、Smad3、Smad4、Ⅰ型胶原的mRNA表达和p-Smad2、p-Smad3、p-Smad4蛋白表达均显著上调(P<0.05或P<0.01),转化生长因子β1和Ⅰ型胶原蛋白水平显著升高(P<0.05或P<0.01);②与KK-Ay对照组相比,KK-Ay游泳组小鼠心肌纤维化无显著性变化,心肌中转化生长因子β1 mRNA和蛋白水平、Smad4 mRNA表达显著下降(P<0.05);KK-Ay跑台组小鼠心肌纤维化程度改善显著,心肌中miR-29a mRNA表达和蛋白水平均上升(P<0.05),转化生长因子β1、Smad2、Smad3和Ⅰ型胶原mRNA表达及转化生长因子β1、Ⅰ型胶原蛋白水平显著下降(P<0.05),p-Smad2、p-Smad3和p-Smad4蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01);④结果说明,2型糖尿病小鼠心肌间质纤维化程度严重;跑台运动可通过上调2型糖尿病小鼠心肌中miR-29a来抑制TGF-β1/Smads途径进而改善心肌纤维化,但游泳运动效果不显著。

摘要： 背景:人早孕蜕膜间充质干细胞及丹参酮ⅡA具有抗粘连作用,均对宫腔粘连有一定疗效,但其具体机制待进一步研究.目的:探索人早孕蜕膜间充质干细胞联合丹参酮ⅡA治疗宫腔粘连的效果及机制.方法:采用胶原酶Ⅰ消化法分离培养人早孕蜕膜间充质干细胞,选取45只雌性4-6周龄SD大鼠,随机分为5组,每组9只,分别为对照组、模型组、丹参酮组、干细胞组及联合治疗组.对照组进行假手术;模型组进行机械刮宫造模后不干预;干细胞组则在造模后7 d经宫旁注射0.2 mL人早孕蜕膜间充质干细胞悬液(1×109 L-1),每隔3 d注射1次,共3次;丹参酮组在造模后7 d灌胃11 mg/(kg·d)丹参酮ⅡA溶液,持续灌胃1周;联合治疗组则为上述两种治疗方式的联合运用.对照组及模型组在术后5,10,15 d取材,各治疗组则在最后一次治疗后5,10,15 d后取材,苏木精-伊红染色、Masson染色观察受损子宫的愈合程度;ELISA检测血清雌激素E2及血管内皮生长因子水平;q-PCR法检测子宫组织中miR-29a mRNA表达;Western blot检测子宫组织转化生长因子β1、Smad3及基质金属蛋白酶9蛋白表达.结果 与结论:①与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜纤维化面积比显著增加(P<0.05),而内膜厚度及腺体数量显著下降(P<0.05);与模型组比较,联合治疗组大鼠子宫内膜纤维化面积比显著下降(P<0.05),而内膜厚度及腺体数量显著增加(P<0.05),干细胞组及丹参酮组大鼠子宫内膜纤维化面积比也显著下降(P<0.05);②与模型组比较,丹参酮组、干细胞组及联合治疗组血清雌激素E2水平显著升高(P<0.05),血管内皮生长因子水平显著下降(P<0.05),miR-29a mRNA表达显著升高(P<0.05),联合治疗组转化生长因子β1、Smad3蛋白表达明显下降(P<0.05),丹参酮组基质金属蛋白酶9蛋白表达明显上升(P<0.05);③结果 表明,人早孕蜕膜间充质干细胞与丹参酮ⅡA联合治疗可有效修复大鼠子宫内膜,其机制可能通过调控miR-29a降低转化生长因子β1、Smad3蛋白水平,进而改善纤维化.

摘要： 目的:探讨原发性肝癌(HCC)患者血清miR-29a相对表达水平。方法:纳入30例慢性乙型肝炎(CHB)患者(CHB组)、45例乙型肝炎肝硬化(HBVRC)患者(HBVRC组)、60例HCC患者(HCC组)和来自体检中心的40例健康体检者(对照组)作为研究对象。检测并比较所有研究对象血清中miR-29a相对表达水平的差异,分析HCC患者血清miR-29a相对表达水平的影响因素及与血清AFP水平的相关性,ROC曲线分析血清miR-29a相对表达水平联合血清AFP水平在诊断HCC中的临床效能。结果:对照组、CHB组、HBVRC组和HCC组患者血清miR-29a的相对表达水平分别为0.19(0.16~0.22),0.37(0.28~0.44)、0.66(0.58~0.73)和0.84(0.76~0.91),4组间比较差异有统计学意义(F=134.11,P<0.05);血清miR-29a相对表达水平在对照组、CHB组、HBVRC组和HCC组中逐渐升高,两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。单因素分析结果显示,HCC患者血清miR-29a相对表达水平在血清AFP水平、肿瘤直径、肿瘤细胞分化程度、是否存在门静脉癌栓、有无远处转移和TNM分期上差异有统计学意义(均P<0.05)。存在门静脉癌栓(OR=3.564)、远处转移(OR=4.029)、TNM分期越高(OR=5.113)均是HCC患者血清miR-29a相对表达水平升高的危险因素。HCC组患者血清AFP水平为(654.25±35.14)ng/ml,HCC患者血清miR-29a相对表达水平与AFP呈现显著正相关性,相关系数r=0.863,P<0.05。AFP诊断HCC的曲线下面积为0.836(95%CI:0.769~0.903),当截断值为544.40 ng/ml时,此时敏感度和特异度分别为81.00%和66.70%;miR-29a相对表达水平诊断HCC的曲线下面积为0.913(95%CI:0.866~0.959),当截断值为0.755,此时敏感度和特异度分别为84.3%和89.3%;AFP联合miR-29a诊断HCC的曲线下面积为0.942(95%CI:0.905~0.979),敏感度和特异度分别为90.00%和92.62%。结论:HCC患者血清miR-29a相对表达水平显著升高,可作为HCC的一种血清学标志物。

摘要： 目的研究病理生理学中miR-29a调控Wnt/β-catenin信号改善癫痫大鼠学习记忆能力并减少神经细胞凋亡的机制。方法用氯化锂-匹罗卡品构建癫痫大鼠模型,实验分成对照组、模型组、miR-NC组(mimics control治疗)、miR-29a组(miR-29a mimics治疗)、miR-29a+SB216763组(miR-29a mimics、Wnt/β-catenin激活剂SB216763治疗),qRT-PCR方法检测海马神经组织中miR-29a表达,Western印迹检测海马神经组织中β-catenin、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、c-Myc蛋白表达,水迷宫实验检测学习记忆能力,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,可见分光光度法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果与对照组比较,模型组大鼠海马神经组织β-catenin、c-Myc蛋白表达量显著升高,miR-29a表达量显著降低,逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数显著减少,平台象限停留时间显著缩短,细胞凋亡指数、Bax蛋白表达量及MDA含量显著升高,Bcl-2蛋白表达量及SOD、GSH-Px含量显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-29a组海马神经组织β-catenin、c-Myc蛋白表达量显著降低,miR-29a表达量显著升高,逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数显著增多,平台象限停留时间显著延长,细胞凋亡指数、Bax蛋白表达量及MDA含量显著降低,Bcl-2蛋白表达量及SOD、GSH-Px含量显著升高(P<0.05)。与miR-29a组比较,miR-29a+SB216763组海马神经组织β-catenin、c-Myc蛋白表达量显著升高,逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数显著减少,平台象限停留时间显著缩短,细胞凋亡指数、Bax蛋白表达量及MDA含量显著升高,Bcl-2蛋白表达量及SOD、GSH-Px含量显著降低(P<0.05)。结论miR-29a抑制Wnt/β-catenin信号改善癫痫大鼠学习记忆能力并减少神经细胞凋亡。

摘要： 目的:探讨外周血miR-10a、miR-29a水平对早期脓毒症急诊患者预后的预测作用。方法:收集早期脓毒症急诊患者94例为观察组,选取同期82例健康体检者为对照组。其中观察组根据病情严重程度分为轻、中、重度3组。比较2组外周血miR-10a和miR-29a的表达水平,以及观察组不同预后患者治疗前miR-10a和miR-29a的表达水平。分析外周血miR-10a、miR-29a表达水平及miR-10a联合miR-29a检测对早期脓毒症急诊患者预后的预测价值。结果:观察组外周血miR-10a和miR-29a表达水平高于对照组(P均<0.05);观察组病情严重程度不同患者外周血miR-10a和miR-29a表达水平中,与轻度组比较,中度组和重度组患者表达水平升高,而重度组患者又显著高于中度组(P均<0.05);治疗1个月后,预后不良者18例,预后良好者治疗前外周血miR-10a和miR-29a的表达水平低于预后不良者(P均<0.05);miR-10a、miR-29a表达水平的最佳截断点分别为2.74和1.39,miR-10a、miR-29a两者联合检测的灵敏度、特异度和曲线下面积(AUC)均高于单独检测,分别为83.33%、85.53%和0.895。结论:早期脓毒症急诊患者外周血miR-10a、miR-29a表达水平均升高,可反应患者病情严重程度,两者联合检测预测早期脓毒症急诊患者的预后效能较高。

摘要： 目的研究miR-29a通过靶向调控瞬时受体电位通道家族4(TRPV4)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法建立睾丸GC-1细胞缺氧复氧模型,RT-PCR检测不同复氧损伤时间点miR-29a和TRPV4的表达水平;分别采用MTT实验、流式细胞术检测转染miR-29a对GC-1细胞增殖和凋亡能力的变化;荧光素酶实验证实miR-29a和TRPV4的靶向关系,Western blot法测定转染miR-29a后细胞中TRPV4的蛋白表达水平。结果miR-29a随着复氧损伤时间的增加,其表达显著降低,而TRPV4的表达明显增加;过表达miR-29a能显著促进GC-1细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡水平。沉默miR-29a可使GC-1细胞的增殖能力明显减弱,凋亡水平增加;荧光素酶报告实验表明TRPV4是miR-29a的下游靶基因。过表达miR-29a能明显抑制GC-1细胞的TRPV4表达,而沉默miR-29a能显著促进TRPV4表达。结论MiR-29a可以通过靶向调控TRPV4来改变GC-1细胞的增殖和凋亡能力,从而影响睾丸IRI的发生发展。

摘要： 目的:探讨microRNA-29a(miR-29a)在子宫内膜癌细胞中的表达及意义.方法:应用基因芯片技术检测并分析在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中差异性表达的miRNA;RT-PCR检测子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中miR-29a的表达水平;采用脂质体瞬时转染法将miR-29a mimic/inhibitor及相应的阴性随机对照序列转染入子宫内膜癌细胞系HEC-1A中;RT-PCR检测转染后细胞中的miR-29a表达水平;利用MTT、Transwell、划痕实验及Annexin V-FITC分别检测miR-29a对HEC-1A细胞增殖、侵袭、迁移及细胞凋亡的影响;miRNA靶基因预测网站Targetscan对miR-29a的靶基因进行预测,双荧光素酶基因报告及Western blot实验进行验证;最后应用Western blot检测miR-29a对子宫内膜癌细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路PI3K、p-AKT、mTOR蛋白表达的影响.结果:miR-29a在子宫内膜癌组织中的表达水平较正常子宫内膜组织明显降低(P=0.021);过表达miR-29a能够显著抑制HEC-1A的增殖(P=0.011)、侵袭(P=0.004)及迁移能力(P=0.004),促进其发生凋亡(P=0.007),而抑制HEC-1A细胞中miR-29a的表达能显著促进细胞的增殖(P=0.038)、侵袭(P=0.008)及迁移能力(P=0.027),抑制其发生凋亡(P=0.029);且过表达miR-29a能够在HEC-1A细胞中通过负向调控PI3K表达(P=0.023)下调p-AKT(P=0.037)、mTOR(P=0.019)蛋白表达,而抑制HEC-1A细胞中miR-29a的表达能够通过促进PI3K表达(P=0.044)上调p-AKT(P=0.039)、mTOR(P=0.028)蛋白表达.结论:子宫内膜癌中低表达miR-29a可能通过抑制PI3K的表达,从而下调PI3K/AKT/mTOR信号通路,抑制子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,并促进细胞发生凋亡,从而发挥着抑癌基因的作用.

摘要： 目的 探究lncRNA NEAT1通过负调控miR-29a促进低氧低糖诱导的肺纤维化进程的机制.方法 收集健康者和缺血再灌注引起急性肺损伤患者的血清样本,通过qRT-PCR检测血清样本中NEAT1与miR-29a的表达.构建肺纤维化细胞模型和动物模型,进行离体和在体的RNA干扰,通过显微镜观察细胞的形态学改变,Hoechst染色检测细胞凋亡,HE染色和Masson染色评估肺组织病理改变,肺组织羟脯氨酸(HYP)含量判定肺组织纤维化程度,Western blot分析细胞中纤维化标志蛋白col1、col3a1、α-SMA、TGF-β 的表达,qRT-PCR检测NEAT1、miR-29a的表达;再通过RIP和双荧光素酶报告基因验证NEAT1与miR-29a之间的相互作用及靶向关系.结果 在缺血再灌注引起急性肺损伤患者的血清样本中,NEAT1表达上调,miR-29a表达下调.在细胞模型和动物模型中,同样发现NEAT1上调和miR-29a下调.在低氧低糖诱导的肺纤维化细胞模型中,发现敲除NEAT1可以抑制因低氧低糖造成的肺泡上皮细胞形态由鹅卵石型向长梭型变化,同时抑制肺泡上皮细胞的凋亡,降低纤维化标志蛋白col1、col3a1、α-SMA、TGF-β的表达;RIP实验揭示了NEAT1与miR-29a直接结合;双荧光素酶报告基因检测发现,NEAT1靶向调控miR-29a;抑制miR-29a可以逆转敲除NEAT1对低氧低糖诱导肺泡上皮细胞凋亡和降低纤维化标志蛋白col1、col3a1、α-SMA、TGF-β 表达的抑制作用,进而促进肺纤维化进程.结论 lncRNA NEAT1通过靶向抑制miR-29a促进低氧诱导的肺纤维化进程,为低氧诱导肺纤维化的机制和新药的研发提供新思路.

摘要： 目的 研究miR-29a通过靶向调控瞬时受体电位通道家族4(TRPV4)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 建立睾丸GC-1细胞缺氧复氧模型,RT-PCR检测不同复氧损伤时间点miR-29a和TRPV4的表达水平;分别采用MTT实验、流式细胞术检测转染miR-29a对GC-1细胞增殖和凋亡能力的变化;荧光素酶实验证实miR-29a和TRPV4的靶向关系,Western blot法测定转染miR-29a后细胞中TRPV4的蛋白表达水平.结果 miR-29a随着复氧损伤时间的增加,其表达显著降低,而TRPV4的表达明显增加;过表达miR-29a能显著促进GC-1细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡水平.沉默miR-29a可使GC-1细胞的增殖能力明显减弱,凋亡水平增加;荧光素酶报告实验表明TRPV4是miR-29a的下游靶基因.过表达miR-29a能明显抑制GC-1细胞的TRPV4表达,而沉默miR-29a能显著促进TRPV4表达.结论 MiR-29a可以通过靶向调控TRPV4来改变GC-1细胞的增殖和凋亡能力,从而影响睾丸IRI的发生发展.

摘要： 本发明涉及用于调节肝炎病毒复制的方法和医药组合物，其涉及miR‑130a RNA、miR‑130b RNA、miR‑204 RNA、miR‑1236 RNA或其组合。

摘要： 本发明涉及一种用于检测急性高山病的microRNA标志物及其在制备急性高山病检测试剂盒中的应用。通过定量PCR等的方法检测被测者血中的microRNA‑676‑3p、microRNA‑181b‑5p、microRNA‑193b‑5p的含量，并与正常microRNA水平比较来诊断急性高山病，该急性高山病分子标志物microRNA灵敏度高，特异性强，操作方便，安全无创伤及易于大量筛查，且联合使用效果更优。

摘要： 本发明涉及一种用于检测急性高山病的microRNA标志物及其在制备急性高山病检测试剂盒中的应用。通过定量PCR等方法检测被测者血中的microRNA‑676‑3p、microRNA‑181b‑5p、microRNA‑3591‑3p的含量，并与正常microRNA水平比较来诊断急性高山病，该急性高山病分子标志物microRNA灵敏度高，特异性强，操作方便，安全无创伤及易于大量筛查，且联合使用效果更优。

摘要： 本发明公开了MiR-17，miR-20a，miR-29c和miR-223作为鼻咽癌分子标志物的应用。本发明提出利用血清中4个微小RNA作为鼻咽癌的分子标志物并提出了检测方法：抽取外周血血清中总RNA，并逆转录为cDNA，实时定量PCR法获得4个微RNA Ct值，通过公式A＝(Ct

摘要： 本发明公开了一种miR‑486、miR‑146b和miR‑15b探针设计方法，所述具体方法步骤如下：步骤一：设计茎环‑miR‑486序列为SH‑(CH2)6‑AAA AAC TCG GGG CAG CTC AGT ACA GGA TTT TT‑6‑FAM。本发明通过设计三种茎环结构3′端修饰了不同荧光分子，FAM修饰茎环‑miR‑486，Cy5修饰茎环‑miR‑146b，Cy3修饰茎环‑miR‑15b，5′端通过金‑巯键修饰到金纳米表面，由于茎环的特殊结构，荧光分子将与金纳米表面接触，荧光猝灭，当目标miRNA存在，由于碱基互补配对，打开茎环结构，使得荧光信号分子远离金纳米表面，从而可检测到相应荧光信号大大增加，实现了对转录因子三种miRNA的快速同时检测，具有良好的灵敏度和特异性。

摘要： 本发明涉及一种用于检测急性高山病的microRNA标志物及其在制备急性高山病检测试剂盒中的应用。通过定量PCR等方法检测被测者血中的microRNA‑676‑3p、microRNA‑181b‑5p、microRNA‑3591‑3p的含量，并与正常microRNA水平比较来诊断急性高山病，该急性高山病分子标志物microRNA灵敏度高，特异性强，操作方便，安全无创伤及易于大量筛查，且联合使用效果更优。

摘要： 本发明涉及一种用于检测急性高山病的microRNA标志物及其在制备急性高山病检测试剂盒中的应用。通过定量PCR等的方法检测被测者血中的microRNA‑676‑3p、microRNA‑181b‑5p、microRNA‑193b‑5p的含量，并与正常microRNA水平比较来诊断急性高山病，该急性高山病分子标志物microRNA灵敏度高，特异性强，操作方便，安全无创伤及易于大量筛查，且联合使用效果更优。

摘要： 本发明涉及用于调节肝炎病毒复制的方法和医药组合物，其涉及miR‑130a RNA、miR‑130b RNA、miR‑204 RNA、miR‑1236 RNA或其组合。

摘要： 本发明涉及医学生物检测技术领域，本发明提供了一种用于检测血浆或血清中的hsa-mir-135a、hsa-mir-302d及hsa-mir-10b的含量，来预测肝癌发生或转移的试剂或试剂盒、及其相应的检测方法。本发明为早期诊断肝癌的发生、预测肝癌的转移提供了新的手段，以便尽早进行临床干预，防止病情进展，改善患者预后。

摘要： 本发明描述利用例如miR-409-5p抑制剂的miRNA抑制剂治疗癌症、癌症转移和耐药性癌症的方法。本发明也描述使用miRNA作为生物标记物；例如用于预测对癌症药物的反应性，检测癌症的疾病状态的方法。