新生鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、纯化与鉴定

摘要

目的从新生SD大鼠体内分离提取肺泡Ⅱ型上皮细胞,为肺部相关疾病提供体外模型方法胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ消化分离细胞,差速贴壁法和大鼠IgG免疫黏附法纯化。采用倒置显微镜、透射电镜、共聚焦显微镜以及BCIP/NBT碱性磷酸试剂盒对细胞进行观察和鉴定。结果采取胰蛋白酶、胶原酶消化得到细胞,活力为(94.82±1.64)%,纯度为(95.96±0.90)%。倒置显微镜观察细胞内呈立方形,岛状生长,胞浆内有黑色颗粒;透射电镜下观察到特异性板层小体;共聚焦显微镜下可看到表面活性蛋白C表达;BCIP/NBT碱性磷酸试剂盒鉴定后可观察到细胞胞浆内有深蓝色颗粒。结论用胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ消化可得到高纯度的肺泡Ⅱ型上皮细胞,可满足体外实验的需要。