早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离纯化、原代培养及鉴定

摘要

[目的]建立一套可靠的早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)分离、纯化和培养技术,用于体外研究早产儿肺部疾病.[方法]采用胰酶和胶原酶消化胎龄20d早产鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化早产鼠AECⅡ,并进行原代培养.用细胞角化蛋白(cytokeratin)进行二氨基联苯胺(DAB)及荧光免疫细胞化学显色,和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定.[结果]AECⅡ体外培养24～48 h,增殖代谢旺盛,进入对数生长期,生长状态最佳.cytokeratin在DAB免疫细胞化学及荧光免疫细胞化学中均有表达.透射电镜观察可见细胞内板层小体.[结论]该方法所得细胞产量大、纯度高,是一种可靠的早产鼠AECⅡ的分离纯化培养技术,对体外研究早产儿肺部疾病如高氧肺损伤等有重要意义.