H9亚型禽流感病毒TaqMan MGB荧光RT-PCR检测方法的建立

摘要

根据GenBank中发表的H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了一种检测H9亚型AIV的荧光RT-PCR方法,利用该方法和商品化试剂盒对临床样本同时进行检测.结果显示,该方法可特异性检测H9亚型AIV,与H3和H5亚型AIV、新城疫病毒、鸭病毒性肠炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、减蛋综合征病毒等主要禽病病毒无交叉反应;该方法检测范围为10-1～10-5个拷贝数,相关系数R2=0.997.对3个不同浓度的RNA进行组间和组内重复性试验,每个浓度的Ct值变异系数均小于2.0％,具有良好的重复性.用本方法和商品化试剂盒对采集的349份野鸟粪便进行检测,两者具有高度的一致性(K=0.85),本研究建立的方法检测临床样本结果更接近真实值.本研究提供了一种快速、准确、敏感和特异的H9亚型AIV检测方法,可为临床诊断和流行病学调查提供可靠的检测依据.宁夏是中亚野鸟迁徙的主要旅居点,应加强野鸟和家禽群体的疫病监测,做到"早发现、早诊断、早处置".