沙门氏菌重组酶聚合酶检测方法的建立及应用

摘要

建立一种重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)检测沙门氏菌(Salmonella)的方法.本研究依据沙门氏菌侵袭蛋白A基因(invA)的保守序列设计特异性引物,通过对反应时间的优化,建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应20 min,即可实现对目的片段的有效扩增;除沙门氏菌外,其他26种食源性致病菌均无扩增,具有良好的特异性;以沙门氏菌基因组DNA作为模板,该方法的检测灵敏度为1.1×10-3 ng/μL,与本研究应用的实时荧光聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,PCR)方法一致;人工污染实验表明,当羊肉、鸡肉和西兰花样品污染量为4 CFU/25 g,增菌8h,即可通过RPA方法检出沙门氏菌.在人工污染实验中,RPA和PCR检测结果一致.本研究建立的沙门氏菌的RPA检测方法特异性强、操作简单、为食源性致病菌的鉴定提供了一种新的方向.