鸡沙门氏菌与奇异变形杆菌双重SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用

摘要

建立一种快速、特异、敏感的鸡沙门氏菌与奇异变形杆菌检测方法.根据Gen Bank中已发表的禽源致病性沙门氏菌和奇异变形杆菌基因组序列,采用Primer Express5.0软件分别设计一对特异引物,沙门氏菌扩增片段279bp,奇异变形杆菌扩增片段395bp,以SYBR Green I为扩增产物荧光染色剂,建立一种具有特异性、敏感性,且能快速检测鸡沙门氏菌与奇异变形杆菌双重SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并进行反应体系的优化、敏感性分析、特异性验证、重复性试验,并用临床组织样本对该方法的特异性进行检测.经双重SYBR Green I荧光定量PCR方法进行检测，特异性扩增曲线，走向一致，熔解曲线趋于一致。说明该方法敏感性高、特异性强、重复性好，可用于禽源致病性沙门氏菌与奇异变形杆菌快速监测和早期临床诊断。