5类致泻性大肠埃希氏菌多重荧光PCR检测方法的建立

摘要

目的:建立快速检测和鉴别5类致泻大肠埃希氏菌的多重实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法.方法:根据5类致泻大肠埃希氏菌的11组毒力基因eae、stx1、stx2、ipaH、uidA、estla、estlb、aggR、pic、elt、astA建立多重实时荧光PCR方法,该方法包括A、B2个反应体系,可分别检测肠致病性大肠埃希氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌、肠侵袭性大肠埃希氏菌、肠产毒大肠埃希氏菌、肠聚集性大肠埃希氏菌,优化反应体系的引物、探针浓度以及PCR反应条件,并对该方法的灵敏度和特异性进行检测.结果:11组基因的探针和引物均可特异性地扩增相应的基因片段,A体系检测下限可达到2.6×104 copies/反应,B体系检测下限可到达2.2×104 copies/反应.结论:本研究所建立的多重实时荧光PCR方法可以对同一样本同时采用A、B2个反应体系进行检测,不但可以确定待测样本是否为大肠埃希氏菌,而且还能判定其致病型别.为大肠埃希氏菌的临床检测、疾病预防以及爆发溯源等提供参考.