多重PCR-DHPLC检测4种主要致腹泻性大肠埃希氏菌方法的建立与应用

摘要

肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)和肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)是引起腹泻、危害食品安全和人类健康的4种主要大肠杆菌.本实验基于ETEC LT基因、EPEC bfpA基因、EHEC O抗原基因和EIEC侵袭性质粒基因序列,设计了4对特异性引物,利用聚合酶链反应(PCR)和变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术,通过体系优化,建立了致腹泻性大肠杆菌多重PCR-DHPLC检测方法,达到同时检测4种致病菌的目的.该方法灵敏度高,最低检测限为EHEC 6×101拷贝/μL、ETEC 1.3 × 102拷贝/μL、EPEC 9×101拷贝/μL、EIEC 7×101拷贝/μL.特异性试验表明,对22种共41株细菌进行检测,所试6株致腹泻性大肠杆菌均为阳性.实践证明,该方法具有良好的实用性,可用于ETEC、EPEC、EHEC和EIEC的单一或混合感染的检测.