副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)鞭毛蛋白FIaA的重组表达与多克隆抗体制备

摘要

副溶血性弧菌是广泛存在于水产品中的革兰阴性致病菌.鞭毛蛋白FlaA是副溶血性弧菌的一种特异性的蛋白质,以该蛋白质作为抗原所制备到的抗体可以作为检测副溶血性弧菌的探针.该研究通过分子生物学方法构建了重组FlaA的表达载体pET28a-flaA,并采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导实现FlaA的大量表达.该重组蛋白以可溶性形式存在,经Ni-NTA亲和柱纯化后对家兔进行免疫,得到浓度为24.32 mg/mL、效价为1:125,000的抗FlaA抗体.通过间接ELISA实验,测得该抗体与副溶血性弧菌反应的灵敏度为1.0×104 CFU/mL,且该抗体与5种其他常见致病菌无明显交叉反应.