检测PML/RARα基因的双重荧光定量PCR方法的建立

摘要

目的 建立在一个反应体系中同时检测融合基因PML/RARα和内参基因ABL的双重荧光定量PCR方法.方法 从DNA聚合酶含量、Mg2+浓度和引物浓度等方面进行优化,建立检测PML/RARα和ABL基因双重荧光定量PCR体系,从分析灵敏度,批内、批间精密度以及检测临床样本阳性率等方面对双重荧光定量PCR反应体系进行性能评价,并同时和北京思尔成公司荧光定量PCR试剂盒进行比较,分析两者的一致性.结果 成功构建双重荧光定量PCR反应体系,检测质粒灵敏度为103copies/ml,检测NB4细胞的灵敏度为10-3,反应体系批内、批间精密度Ct值的变异系数CV都小于5％,检测20例确诊为APL病人,其检测阳性率,和北京思尔成公司的PCR反应试剂一致.结论 成功开发出稳定的双重荧光定量PCR试剂盒,其操作简单,成本低,误差小,能够有效地用于APL分子生物学分型诊断、用药指导、预后观察及MRD监测.