检测DHAV-1和DHAV-3双重荧光定量RT-PCR方法的建立与应用

摘要

我国鸭病毒性肝炎主要由鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和3型(DHAV-3)引起,两种病毒感染雏鸭发病后的临床症状和病理变化非常相似,并且二者临床混合感染情况比较普遍,给该病的正确诊断和防治带来了极大的困难.本研究根据DHAV-1和DHAV-3基因组序列,分别设计合成了两对能特异性扩增片段的引物和对应的两条TaqManTM探针,建立了能够在同一体系中同步检测DHAV-1和DHAV-3荧光定量PCR诊断方法.随后,将250只3日龄健康雏鸭随机均分为5组,前四组分别对每只雏鸭经肌肉注射接种不同剂量的DHAVs,第五组为空白对照.人工感染后于不同时间点取每组雏鸭3只,分别采集心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸腺和法氏囊,应用上述双重荧光定量PCR法定量检测DHAV-1和DHAV-3单独感染和等量共感染后病毒在雏鸭体内病毒动态分布情况,结果显示人工感染DHAVs后病毒在肝脏中含量最高.在感染初期,DHAV-1和DHAV-3等量混合感染雏鸭后在各器官内的增殖速度比二者分别单独感染要快,且感染初期DHAV-1和DHAV-3在雏鸭体内的增殖速度与初始感染剂量呈现明显的正相关.