双酶联合消化法培养人皮肤成纤维细胞

摘要

目的建立一种便捷、高效的人皮肤成纤维细胞体外培养技术,获得大量高纯度原代细胞。方法取健康成年男性包皮标本,去除皮下组织,将皮肤剪成小皮片,以0.25%的胰蛋白酶溶液4 ℃消化过夜后分离去除表皮;将真皮组织剪碎,加入0.1%胶原酶Ⅱ溶液后于37 ℃ CO2孵育箱中消化3~4 h,筛网过滤,收集滤液后离心、培养。绘制细胞生长曲线,HE染色观察细胞形态,细胞免疫荧光、Western blot检测Vimentin鉴定成纤维细胞,取第3代、第6代细胞以流式细胞术检测细胞纯度。结果获得原代人皮肤成纤维细胞;细胞生长周期:0~2 d为潜伏期,2~5 d为指数生长期,之后进入平台期;细胞为梭形或星形;Vimentin表达呈阳性,鉴定为成纤维细胞;第3代、第6代成纤维细胞纯度分别为95.82%、99.51%。结论利用双酶联合消化法成功培养高纯度原代人皮肤成纤维细胞,为进一步研究奠定基础。