结核分枝杆菌复合群四重 PCR检测方法的建立及应用

摘要

目的 本文旨在建立一种能快速鉴定结核分枝杆菌复合群不同成员的多重PCR方法.方法 针对结核分枝杆菌复合群4个特异性基因16sRNA、IS6110、RV2652、RV3873设计引物,通过筛选优化引物浓度、退火温度、Mg2+浓度和dNTP浓度,确定了最佳反应条件.结果 扩增产物的大小分别为824 bp、621 bp、418 bp和254 bp,能特异性检测并鉴别出非结核分枝杆菌(824 bp 1条带)、卡介苗(824 bp 和621 bp 2条带)、牛分枝杆菌(824 bp、621 bp和254 bp 3条带)和结核分枝杆菌(4条带).检测灵敏度达到125fg.对42份牛结核菌素皮内变态反应阳性牛的肺淋巴结样本和115份肺结核病人的痰液样品进行了检测,其检出率或准确率明显高于传统方法.结论 成功建立了多重PCR方法,能快速、准确地对结核分枝杆菌群进行种、型鉴别.