抗EV71病毒人源抗体Fab段表达基因的构建及序列分析

摘要

目的 从成人外周血淋巴细胞中扩增抗体可变区并构建人源抗体Fab段表达基因,为构建抗EV71病毒人源化单克隆抗体库奠定基础.方法 从EV71病毒中和抗体阳性且免疫功能健全的成人全血中,分离淋巴细胞并提取总RNA,经反转录获得cDNA.用一组人IgG Fab基因特异性引物,从合成的cDNA中分别扩增抗体轻、重链可变区,应用重叠PCR技术构建Fab段表达基因,测序分析抗体基因的多样性.结果 成功扩增人抗体可变区基因并组装Fab段表达盒,表达盒的长度约为1 500 bp,测序分析结果表明,Fab段的多样性可达94.12%.结论 成功构建人源抗体Fab段基因,为抗EV71病毒人源性单克隆抗体库的制备奠定了基础.