抗腮腺炎病毒抗体Fab段基因的克隆及重组表达载体的构建

摘要

目的　构建抗腮腺炎病毒抗体Fab段基因重组表达载体。方法　从腮腺炎患者和腮腺炎抗体IgG阳性正常人群的淋巴细胞中提取总RNA ,逆转录成cDNA。用相应的引物进行PCR ,扩增出轻链和重链Fd段基因 ,经酶切后分别和噬粒载体pComb3连接 ,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1 blue菌株 ,将轻链和重链Fd基因先后克隆入pComb3中。结果　从分离出的淋巴细胞中共提取高质量RNA约 1 1 0 μg ,经逆转录、PCR ,分别扩增出约 70 0bp大小的κ、λ和Fd基因。PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接 ,在 2 5kv,2 0 0Ω ,2 5 μF的条件下电转化 ,最终转化率为 :2 4 8× 1 0 7。随机挑取电转化后的 1 0个菌落 ,经PCR鉴定 ,共有 5个克隆同时含有轻链和重链Fd基因 ,抗体Fab的重组率为 5 0 %。结论　获得的抗体Fab重组表达载体是高效、实用的 。