比较单独消化法及分步消化法培养新生大鼠原代软骨细胞的生物学特性

摘要

背景:原代软骨细胞体外培养是研究骨骼生长的重要方法之一。目前原代软骨细胞的分离方法主要有单独消化法和分步消化法,但两种方法对软骨细胞生物学性能的影响尚不清楚。目的:比较两种方法对新生大鼠软骨细胞生物学性能的影响,为软骨发育的程序化研究提供实验基础。方法:无菌条件下取出新生SD大鼠关节软骨,分别采用Ⅱ型胶原蛋白酶单独消化法、胰蛋白酶和Ⅱ型胶原蛋白酶分步消化法分离软骨细胞,并进行体外培养。光学显微镜下观察软骨细的形态,CCK-8法检测软骨细胞的增殖活性,半定量免疫荧光分析软骨细胞的Ⅱ型胶原蛋白表达。结果与结论:①单独消化法和分步消化法都可以得到大量软骨细胞,但分步消化法较单独消化法所得软骨细胞的纯度更高;②光学显微镜下观察,两种方法消化所得细胞在形态学上无明显差异;③单独消化法所得细胞生长速度更快;④免疫荧光半定量分析显示两种方法所得软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白表达一致;⑤以上结果表明,分步消化法更适于新生大鼠原代软骨细胞的分离培养。