Ⅰ型胶原酶一步消化法高效、快速分离培养人头皮毛乳头细胞及微囊化培养的研究

摘要

目的:寻求高效、快速体外分离培养人头皮毛乳头细胞的方法;并探讨微囊化人头皮毛乳头细胞体外培养及异体移植的可行性;同时对海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊与海藻酸钠-BaCl2(BA)微囊的物理、生物性能进行评价。
　　方法:头皮在真皮-皮下组织交界处剪开以获得含有毛囊中下部的皮下脂肪。将含有毛囊中下部的皮下脂肪置于青霉素瓶中,用眼科剪剪成肉泥状,加入胶原酶Ⅰ进行消化。当消化至真皮鞘较为松散但仍包裹毛乳头时,以吸管机械吹打帮助毛乳头游离。通过沉淀、离心的方法,将毛乳头与其它成分分离。最后,在显微镜下用移液器收集毛乳头后进行培养。对毛乳头贴壁率、细胞迁出时间、工作强度、污染机会与显微解剖法、显微解剖加酶消化法进行比较。细胞培养成功后,取4-6代细胞进行实验。在高压电场微囊发生器作用下,将人头皮毛乳头细胞分别用APA微囊与BA微囊包裹。将微囊化的细胞进行体外培养和异体移植,观察微囊化细胞在体外及异体内的存活情况,并对两种微囊的生物相容性、机械强度、免疫隔离效果及微囊内细胞活性进行比较。
　　结果:“Ⅰ型胶原酶一步消化法”分离一个毛乳头平均的显微镜下工作时间为15秒,污染率为0％,与显微解剖法及显微解剖加酶消化法比较,显著降低了工作强度和污染机会。其所需要的显微技术仅仅是在显微镜下用移液器将毛乳头吸出,大大降低了操作难度。同时,该法保留了显微解剖加酶消化法促进毛乳头贴壁和细胞迁出的优点。在微囊的相互比较方面,APA微囊生物相容性优于BA微囊(P<0.01),但机械强度低于BA微囊(P<0.01)。成囊后短期BA微囊内细胞活性高于APA微囊,但APA微囊内细胞活性增高较快,与未微囊化细胞相比,两者细胞活性均有所下降。在微囊完整,表面无纤维化时,用锥虫蓝染色观察,两种微囊均可起到良好的免疫隔离效果。
　　结论:“Ⅰ型胶原酶一步消化法”是一种高效、快速分离培养人头皮毛乳头细胞的方法。微囊化人头皮毛乳头细胞可在体外及同种异体内培养;综合评价各种类型微囊的利弊,在不同情况下选择不同的成囊方式是必要的。

目录

封面

中文摘要

英文摘要

目录

前言

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

一、实验材料

二、实验方法

三、统计学处理

1、毛乳头细胞培养的意义：

2、常用的人头皮毛乳头细胞分离培养方法及其比较：

3、Ⅰ型胶原酶一步消化法的建立：

小结

1、“Ⅰ型胶原酶一步消化法”能显著降低分离毛乳头过程中的工作强度和污染机会。

2、“Ⅰ型胶原酶一步消化法”保留了显微解剖加酶消化法促进毛乳头贴壁和细胞迁出的优点。

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

一、 实验材料

二、 实验方法

三、统计学处理

讨论

1、微囊技术及其应用：

2、APA微囊与BA微囊的比较：

3、微囊化毛乳头细胞的特点及其应用前景：

小结

1、 微囊化人头皮毛乳头细胞可在体外及异体内培养。

2、 BA微囊较APA微囊机械强度好。

3、 APA微囊较BA微囊生物相容性好。

4、 APA微囊较BA微囊更利用营养物质的交换。

5、 当两种微囊完整、表面无纤维化时均可起到良好的免疫隔离效果。

6、 在不同情况下选择不同的微囊是必要的。

参 考 文 献

论文综述

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致谢