YAP蛋白对C6胶质瘤干细胞特性的影响

摘要

背景：YAP蛋白能够促进与干细胞特性相关蛋白基因的活化，因此推测YAP在维持C6胶质瘤干细胞特性中发挥重要作用，且暂无此方面研究报道。目的：探讨YAP蛋白在胶质瘤干细胞干性维持中发挥的作用。方法：使用无血清培养基培养C6胶质瘤细胞获取C6胶质瘤干细胞，细胞免疫荧光染色检测干细胞标志物CD133和Nestin蛋白表达；Western blot、qRT-PCR和细胞免疫荧光染色观察胶质瘤干细胞和胶质瘤细胞YAP表达差异。进一步使用慢病毒转染将C6胶质瘤细胞YAP蛋白过表达，使用shRNA慢病毒转染将C6胶质瘤干细胞YAP蛋白敲低，Western blot检测CD44、Nanog和Oct-4蛋白表达，干细胞克隆球形成实验鉴定细胞成球能力。结果与结论：①C6胶质瘤干细胞同时表达CD133和Nestin；②C6胶质瘤干细胞与C6胶质瘤细胞相比，YAP蛋白和mRNA表达升高；③YAP过表达后C6胶质瘤细胞的干细胞标志物CD44、Nanog和Oct-4表达明显上调，肿瘤干细胞克隆球体积明显增大、数量明显增多；④YAP敲低后C6胶质瘤干细胞的干细胞标志物CD44、Nanog和Oct-4表达明显下调，肿瘤干细胞克隆球体积明显减小、数量明显减少；⑤结果表明，C6胶质瘤细胞中存在肿瘤干细胞，YAP蛋白在胶质瘤干细胞中高表达并且与胶质瘤干细胞特性的维持密切相关。