YAP

摘要： 背景:自噬参与牙周膜细胞对正畸力的应变,但机械刺激如何诱导自噬尚不明确。Hippo-Yes相关蛋白(YAP)通路对机械刺激敏感,参与自噬的调控。目的:观察正畸牙压力侧牙周膜细胞Hippo-YAP通路和自噬相关因子的表达变化,探究Hippo-YAP通路是否参与牙周膜细胞对机械刺激的应变,以及它与自噬之间的关系。方法:54只C57BL/6小鼠随机分为空白组和8个实验组(分别加力30 min,1 h,2 h,4 h,12 h,1 d,3 d,7 d),实验组小鼠牙移动建模,建模后按设定时间,取小鼠右上第一磨牙行苏木精-伊红染色观察压力侧牙周膜组织形态改变,抗酒石酸酸性磷酸酶染色计数破骨细胞,免疫组织化学染色检测active-YAP以及Beclin-1、LC3B的表达。结果与结论:①随正畸力施加,苏木精-伊红染色可见压力侧牙周膜先被压缩,后稍恢复;②加力12 h后破骨细胞开始增多(P<0.01),而后随加力时间延长,破骨细胞数量逐渐增加,至加力7 d时破骨细胞数量最多(P<0.01);③实验组压力侧牙周膜细胞自噬相关因子Beclin-1、LC3B的表达与active-YAP的表达在牙移动期间都存在相关性,对比发现它们的变化趋势相似;相关性分析可见Beclin-1、LC3B的表达都与active-YAP的表达呈高度正相关(P<0.01);④提示Hippo-YAP通路参与压力侧牙周膜细胞对机械刺激的应变,它可能是自噬的上游调控,但还有待进一步实验研究。

摘要： 目前全球仍面临着癌症的疾病负担,YAP (Yes-associated protein)作为Hippo信号通路的中央调节器,对组织生长修复、器官大小和干细胞的重编程起着重要的调控作用。本文综述了YAP的最新研究进展、在各个系统中YAP的表达情况以及部分致癌机制,为癌症治疗新靶点的研究提供相关理论依据。

摘要： 目的探究氯沙坦对内皮细胞增殖以及YAP活性的影响。方法本实验于2020年5月至2021年8月在上海交通大学医学院附属新华医院实验室完成。氯沙坦与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)分别或共同刺激人脐静脉内皮细胞,观察内皮细胞增殖变化,分析细胞内YAP磷酸化与胞内分布情况,检测YAP下游基因的表达水平。结果AngⅡ刺激内皮细胞明显增殖,氯沙坦的作用与之相反。同时,氯沙坦显著抑制由AngⅡ诱导的细胞增殖,呈现剂量依赖性以及时间依赖性作用。此外,AngⅡ可显著降低细胞内YAP磷酸化水平,促进YAP向细胞核内转移,还促进YAP下游促增殖基因的表达升高。相反,氯沙坦增加YAP磷酸化水平,抑制YAP的核内转移。共刺激实验发现,氯沙坦抑制了由AngⅡ诱导的YAP去磷酸化与核易位,以及下游基因表达。结论氯沙坦可以抑制内皮细胞中YAP活化,下调YAP下游靶基因表达,抑制内皮细胞增殖。

摘要： 目的探讨miR-1285通过转录共激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法构建miR-1285的质粒,使K562细胞过表达miR-1285及敲低miR-1285,分为miR-1285 mimics、mimics control、miR-1285 inhibitor、inhibitor control四组;采用qRT-PCR法定量分析四组中miR-1285的表达量,验证转染效率,利用CCK8、AnnexinⅤ-FITC方法检测四组K562细胞的凋亡、增殖情况;使用Western blot检测YAP及其下游分子表皮生长因子受体(EGFR)等变化,检测凋亡相关分子BAX、Bcl-2蛋白表达变化。结果敲低miR-1285后,可促进K562细胞的增殖,抑制凋亡,YAP的表达升高,下游分子EGFR表达相应升高,凋亡相关分子BAX降低,而Bcl-2表达升高;而过表达miR-1285后,K562细胞增殖减弱,凋亡增加,YAP表达降低,下游分子P-EGFR表达降低,凋亡分子BAX表达升高,而Bcl-2表达降低。结论miR-1285可通过抑制YAP的表达从而抑制慢性粒细胞白血病K562细胞的增殖、促进凋亡,有望成为治疗慢性粒细胞白血病的靶向分子。

摘要： Hippo通路最先在果蝇体内被发现,在哺乳动物中具有高度保守性,其主要功能是调节器官发育及维持内环境稳态。此外,越来越多的研究发现Hippo通路的失调与肿瘤的发生、发展密切相关。本文主要总结了Hippo通路在调节肿瘤细胞增殖、凋亡、转移、肿瘤干细胞特性以及肿瘤免疫抑制等方面的作用,希望可以为相关研究提供借鉴和参考。

摘要： CDK5 belongs to the cyclin-dependent kinase family.CDK5 is multifunctional and plays an important role in neural differentiation.However,the role of CDK5 in osteoblastic differentiation remains unclear.The present study investigated functions and molecular mechanism of CDK5 in osteoblastic differentiation.It was found that,CDK5 inhibition promoted the expression of Runx2,ALP,OCN and OPN of MSCs and the mineralization of MC-3T3E1 cells and MSCs.CDK5 inhibition enhanced the development of F-actin,nuclear localization ofβ-catenin and YAP,as well as the expression of RMRP RNA.When F-actin was suppressed by Blebbistatin,the nuclear localization of YAP andβ-catenin,and expression of RMRP RNA as well as Runx2 and ALP were decreased.These indicate Seliciclib promotes osteoblastic differentiation mainly by F-actin.Moreover,Seliciclib also suppressed the migration of MG-63,suggesting a potential application for Seliciclib in bone defect repair and inhibition of the migration of osteosarcoma cells after osteosarcoma surgical resection.

摘要： 目的探究非酒精性脂肪性肝炎(NASH)早期Yes-相关蛋白(YAP)活性变化特点及其与胆管反应(DR)发生的时空关系。方法通过蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食、硫代乙酰胺(TAA)饮食喂养雄性C57BL/6J小鼠12周,构建NASH小鼠模型。通过HE、Masson染色评估肝脏病理学改变,qPCR技术检测YAP及其靶基因(Ctgf、Cyr61、Acta2)的mRNA表达情况;免疫印记检测YAP的总蛋白表达水平;免疫组化检测YAP、DR标志(K19和Sox9)表达与分布情况。结果在MCD饮食诱导的NASH疾病早期(1~4周),肝组织YAP及其靶基因Ctgf、Cyr6、Acta2的mRNA表达量和YAP总蛋白表达量均增加(P0.05),且YAP阳性胆管样细胞数量逐渐增加(P<0.001)。在TAA饮食诱导的NASH疾病早期(3 d~2周),肝组织YAP及其靶基因Ctgf、Cyr6、Acta2的mRNA表达量和YAP总蛋白表达量均增加(P<0.05)。YAP阳性肝细胞数量在2周达到峰值69.2/×400视野;4周减少至55.2/×400视野(P<0.001),并且在中央静脉附近(即DR发生初始位置)观察到YAP阳性胆管样细胞。6~12周时可在中央静脉周围肝小叶中观察到大量的K19/Sox9阳性DR细胞(P<0.01),同时YAP阳性肝细胞数量持续减少(P<0.001),YAP阳性胆管样细胞数量持续增加(P<0.001)。结论NASH损伤肝脏组织中,YAP激活早于DR发生,YAP活性变化特点及其分布与DR发生分布具有时空相关关系,同时肝细胞内的YAP激活似乎可以诱导肝细胞转分化为胆管样细胞,参与DR发生。

摘要： Targeting the white-to-brown fat conversion is important for developing potential strategies to counteract metabolic diseases;yet the mechanisms are not fully understood.Yes-associated-protein(YAP),a transcription co-activator,was demonstrated to regulate adipose tissue functions;however,its effects on browning of subcutaneous white adipose tissue(sWAT)are unclear.We demonstrated that YAP was highly expressed in cold-induced beige fat.Mechanistically,YAP was found as a target gene of miR-429,which downregulated YAP expression in vivo and in vitro.In addition,miR-429 level was decreased in cold-induced beige fat.Additionally,pharmacological inhibition of the interaction between YAP and transcriptional enhanced associate domains by verteporfin dampened the browning of sWAT.Although adipose tissue-specific YAP overexpression increased energy expenditure with increased basal uncoupling protein 1 expression,it had no additional effects on the browning of sWAT in young mice.However,we found age-related impairment of sWAT browning along with decreased YAP expression.Under these circumstances,YAP overexpression significantly improved the impaired WAT browning in middle-aged mice.In conclusion,YAP as a regulator of sWAT browning,was upregulated by lowering miR-429 level in cold-induced beige fat.Targeting the miR-429-YAP pathway could be exploited for therapeutic strategies for age-related impairment of sWAT browning.

摘要： 目的 探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其可能作用机制.方法 收取上皮性卵巢癌及正常卵巢上皮组织各10例,分离纯化培养CAFs和正常卵巢成纤维细胞(NFs),免疫荧光法鉴定CAFs;收集CAFs或NFs培养上清液与卵巢癌SKOV3细胞建立间接共培养体系;C C K8法检测细胞增殖及顺铂毒性、划痕实验检测细胞迁移能力;DCFH-DA法测定共培养体系中活性氧(ROS)含量;qPCR及Western blot法检测共培养体系SKOV3细胞耐药相关基因YAP、CTGF和Cyr61在mRNA及蛋白水平表达.结果 成功分离培养CAFs或NFs,免疫荧光结果 显示CAFs中平滑肌激动蛋白-α(α-SMA)与成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达阳性;SKOV3细胞与CAFs间接共培养后其增殖能力(P<0.001)、顺铂半数抑制浓度(IC50)(P<0.01)、迁移能力(P<0.01)均较SKOV3细胞单独培养或与NFs共培养组增加,差异有统计学意义;CAFs共培养体系细胞中ROS含量增加(P<0.01),差异有统计学意义;CAFs共培养SKOV3细胞中耐药相关基因YAP(P<0.01)、CTGF(P<0.05)、Cyr61(P<0.01)在mRNA及蛋白水平较单独培养或与NFs共培养SKOV3中表达升高,差异有统计学意义.结论 CAFs可促进SKOV3细胞增殖、迁移,降低SKOV3细胞对顺铂敏感性.其机制一方面可能与ROS促进SKOV3细胞自噬相关;另一方面与卵巢癌细胞中耐药基因YAP、CT-GF及Cyr61表达上调有关.

摘要： 目的 探讨PIEZ01通过YAP传导机械力学信号促进胶质瘤侵袭进展的分子机制.方法(1)标本检测:选择郑州大学第一附属医院神经外科自2015年2月至2017年3月行胶质瘤切除术的94例患者标本行免疫组化染色,检测不同级别胶质瘤组织中PIEZO1表达.(2)细胞实验:不同基质硬度条件下培养人脑胶质瘤细胞系U87、U251,通过免疫荧光染色实验检测PIEZO1和YAP表达,Western blotting实验检测PIEZO 1 表达.(3)慢病毒转染后细胞实验:根据有无转染短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体将细胞分为阴性对照组和sh-PIEZO1组,通过克隆形成实验、增殖、侵袭实验、Western blotting实验等方式研究PIEZO1 在胶质瘤增殖、侵袭中的作用;同时采用Western blotting实验检测PIEZO1 敲低后YAP、FAK、p1-整合素等力学信号通路蛋白的表达,采用RT-PCR法检测YAP下游靶基因CTGF、CYR61的表达,采用免疫荧光染色检测PIEZO1敲低后YAP的表达.结果(1)PIEZO1 表达随胶质瘤级别升高而增高,且异柠檬酸脱氢酶(IDH)野生型患者中PIEZO1 表达高于IDH突变型.(2)随着基质硬度增加,PIEZO1 及YAP表达增加.Western blotting实验结果显示,与0.2 kPa组相比,16和64 kPa组基质培养细胞PIEZO1 蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05)0(3)PIEZO1敲低后,U87细胞形态变大、触角增多,U251细胞多呈较长梭形.与阴性对照组相比,sh-PIEZO1组细胞克隆数明显减少,各时间点增殖率明显降低,侵袭细胞计数明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).同时,与阴性对照组比较,sh-PIEZO1组细胞上皮标志物钙黏附蛋白E(E-cadhein)表达明显增加,间质标志物波形蛋白、Snail及Slug表达明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).最后,Western blotting、RT-PCR实验及免疫荧光实验发现,敲低PIEZO1显著增加了磷酸化(p)-YAP表达,降低了 YAP胞核表达,下调了 YAP下游靶基因Cyr61和CTGF表达,并且显著减低了 p1-整合素和p-FAK水平;阴性对照组与sh-PIEZO1 组组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论PIEZO1通过YAP调控胶质瘤对机械信号的反应,促进胶质瘤细胞增殖和侵袭,可以作为胶质瘤治疗的新靶点.

摘要： 本发明属于分子靶向治疗领域，具体涉及Yes相关蛋白1(Yes‑associated protein 1,YAP1)的小分子抑制剂YAP1‑Y7及其在治疗肿瘤中的应用。一种针对YAP1的小分子抑制剂YAP1‑Y7，所述小分子抑制剂YAP1‑Y7的化学结构式下：。所述小分子抑制剂可抑制YAP1，通过抑制YAP1使YAP1‑TEAD复合物减少，进而抑制肿瘤细胞增殖的作用。所述小分子抑制剂在制备治疗胃癌药物中的应用。本发明提供的针对YAP1的小分子抑制剂与已知抑制剂相比，亲和力强。可作为一种新的抗肿瘤药物来彻底清除肿瘤和干细胞，具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明属于分子靶向治疗领域，具体涉及Yes相关蛋白1(Yes‑associated protein 1,YAP1)的小分子抑制剂YAP1‑Y7及其在治疗肿瘤中的应用。一种针对YAP1的小分子抑制剂YAP1‑Y7，所述小分子抑制剂YAP1‑Y7的化学结构式下：。所述小分子抑制剂可抑制YAP1，通过抑制YAP1使YAP1‑TEAD复合物减少，进而抑制肿瘤细胞增殖的作用。所述小分子抑制剂在制备治疗胃癌药物中的应用。本发明提供的针对YAP1的小分子抑制剂与已知抑制剂相比，亲和力强。可作为一种新的抗肿瘤药物来彻底清除肿瘤和干细胞，具有广泛的应用前景。

摘要： 转录共激活因子YAP1与转录因子Oct4的结合诱导Sox2，Sox2是来自非小细胞肺癌的干细胞样细胞自我更新所必需的转录因子。YAP1的WW结构域与Oct4的PPxY基序结合以诱导Sox2。递送对应于WW结构域的肽可阻止Sox2和干细胞特性的诱导。类似地，PPxY基序的肽和模拟物将能够抑制干细胞特性。公开了影响Yap1:Oct4相互作用的化合物。

摘要： 转录共激活因子YAP1与转录因子Oct4的结合诱导Sox2，Sox2是来自非小细胞肺癌的干细胞样细胞自我更新所必需的转录因子。YAP1的WW结构域与Oct4的PPxY基序结合以诱导Sox2。递送与WW结构域相应的肽可阻止Sox2和干性的诱导。类似地，PPxY基序的肽和模拟物将能够抑制干性。公开了影响Yap1:Oct4相互作用的化合物。

摘要： 本发明涉及的是Hippo信号通路中的效应蛋白YAP和/或TAZ作为靶点在抑制甲型流感病毒感染和复制的用途。具体，本发明公开了YAP和/或TAZ蛋白作为靶分子在制备抗甲型流感病毒药物中的应用；抑制YAP和/或TAZ基因的表达水平能提高细胞在感染甲型流感病毒时的抗病毒能力；抗病毒能力是指TLR3信号通路活化、病毒的复制和增殖能力的降低以及病毒对实验动物肺部组织损伤程度降低。

摘要： 本发明涉及耐药机制研究技术领域，且公开了miR‑920靶向YAP1在食管鳞癌化疗耐药中的机制方法，免疫组织化学技术检测食管鳞癌及化疗耐药组织中YAP1的表达，荧光定量PCR法检测化疗耐药组；本发明通过首先在细胞水平上主要通过双荧光素酶报告基因实验，验证miR920可直接靶向调节YAP1的表达。在此基础上利用慢病毒表达技术构建miR920过表达的食管癌细胞系，通过微球体培养实验等方式验证miR920靶向下调YAP1可降低肿瘤干细胞特性。近一步利用MTS、Westernblot、流式细胞术等方法阐明miR‑920靶向YAP1可逆转食管癌干细胞的凋亡抵抗作用。最后通过临床标本的检测进一步明确miR‑920与YAP1在食管癌化疗耐药产生中作用。从而为食管癌耐药逆转剂的筛选提供实验基础和理论依据。

摘要： 本发明公开了miR‑138模拟物在制备靶向抑制YAP和WWTR1高表达亚型卵巢癌干细胞药物中的应用，本发明利用miR‑138模拟物靶向抑制卵巢癌干细胞中的YAP和WWTR1，从而抑制YAP和WWTR1高表达亚型卵巢癌干细胞的成微球能力、成微球频率和干细胞标志物表达水平，通过建立YAP和WWTR1过表达细胞系证明了YAP和WWTR1的靶向抑制作用在miR‑138模拟物抑制YAP和WWTR1高表达亚型卵巢癌干细胞干性过程中的重要性，经过本研究证实了miR‑138模拟物能够靶向抑制YAP和WWTR1高表达YAP和WWTR1高表达亚型卵巢癌干细胞，因此可以作为治疗含YAP和WWTR1高表达亚型卵巢癌干细胞的卵巢癌的药物。

摘要： 本发明提供了促进受试者的皮肤部位中的伤口愈合的方法。所述方法的方面可包括：向伤口施用有效量的YAP抑制剂组合物，以调节伤口中的Engrailed‑1谱系阴性成纤维细胞(ENF)的机械激活，从而促进伤口的ENF介导的愈合。还提供了在受试者伤口愈合期间防止瘢痕形成的方法以及促进受试者毛发生长的方法。所述方法的方面可包括：在受试者的皮肤部位形成伤口，并向伤口施用有效量的YAP抑制剂组合物，以调节伤口中的Engrailed‑1谱系阴性成纤维细胞(ENF)的机械激活，从而促进伤口的ENF介导的愈合。还提供了试剂盒，所述试剂盒包括一定量的YAP抑制剂组合物以及组织破坏装置。

摘要： 本发明公开了反义寡核苷酸ASOYAP1在抑制多种YAP1阳性癌症中的应用。用生物信息学在线工具分析YAP1蛋白转录组序列信息，筛选长度在20碱基的、能够结合的反义寡核苷酸位点，同时对反义寡核苷酸进行修饰，证明修饰后的反义寡核苷酸具有较高的抑制YAP1mRNA及其蛋白在细胞内的水平的能力。本发明为临床上治疗YAP1高表达且YAP1发挥重要作用的多种癌症细胞，提供了核酸药物治疗的新的手段。

摘要： 本发明涉及光功能晶体材料技术领域，具体涉及一种2.6‑3.4μm宽谱带发射的中红外Er,Dy:YAP激光晶体及其制备方法和应用。该激光晶体的化学分子式为EraDybY(1‑a‑b)AlO3，其中，Er3+和Dy3+均是取代十二面体中心位置的Y3+，通过Er3+和Dy3+两种离子的共掺实现2.6‑3.4μm宽谱带发射，并采用具有较低声子能量及优良热力学性能的YAP晶体作为基质材料，可通过调Q、锁模及可调谐激光技术实现短脉冲及可调谐激光输出，以满足该波段激光在生物医疗、非线性光学、大气监测及材料加工等领域的重要应用。