脂肪来源干细胞向成骨分化及褪黑素干预细胞生物学活性的变化

摘要

背景：研究表明褪黑素能促进脂肪来源干细胞向神经元转化,但对脂肪来源干细胞成骨分化后细胞的作用报道较少。目的：观察脂肪来源干细胞向成骨分化及褪黑素对成骨分化后细胞生物学活性的影响。方法：①取昆明种小鼠附睾处脂肪利用Ⅰ型胶原酶消化法和差速贴壁法获取、纯化脂肪来源干细胞,应用CD44免疫组化染色对细胞进行鉴定。②取第2代脂肪来源干细胞,加入成骨诱导培养基培养,行碱性磷酸酶染色和von Kossa法检测细胞分化情况。③取成骨诱导后的细胞,加入不同浓度的褪黑素,利用MTT法检测24,48 h时细胞增殖情况。4取成骨诱导后的细胞,加入最佳浓度的褪黑素,分别检测加入药物3,6 d时的碱性磷酸酶活性。结果与结论：①接种48 h后大多数细胞贴壁,接种后4 d细胞呈现多种细胞形态,并形成大小不一的细胞集落,传代后的细胞形态趋于稳定,均称长梭型,培养细胞CD44呈阳性表达,阳性颗粒位于胞膜,呈棕黄色。②成骨诱导后的细胞应用von Kossa法染色呈阳性,黑色沉积物在细胞外的基质中呈网格状分布;碱性磷酸酶染色呈阳性,细胞内可见棕黑色颗粒。③在24 h和48 h时间点,1,10,100μmol/L组的吸光度值明显大于空白组（P〈0.05）,选择这3个浓度作为最佳的褪黑素浓度。④各组成骨诱导后细胞内碱性磷酸酶活性随时间延长明显增加,差异有显著性意义（P〈0.05）。褪黑素组（1,10,100μmol/L）在3 d时的碱性磷酸酶活性与空白组相比无明显差异（P〉0.05）,在6 d时较空白组明显增加（P〈0.05）。提示褪黑素可以增强脂肪来源干细胞成骨分化后细胞增殖,并提高细胞内碱性磷酸酶活性。