鸡传染性支气管炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其B细胞表位的鉴定

摘要

为鉴定传染性支气管炎病毒(IBV)B细胞抗原表位,本研究将IBV致弱株CK/CH/LDL97 I病毒与重组N蛋白作为免疫原,交叉免疫BALB/c小鼠,制备了1株抗IBV N蛋白的单克隆抗体(MAb)6D10.Westernblot结果表明该MAb可特异性的识别IBV CK/CH/LDL97 I株和重组N蛋白.同时利用噬茵体展示技术对IBV N蛋白抗原表位进行筛选,获得11个阳性噬茵体克隆.序列分析表明,这11个克隆均展示有"FGPRTK"6个氨基酸的序列,对应于IBV CK/CH/LDL97 I株N蛋白242位～247位氨基酸残基.同时,通过人工合成其编码序列并进行原核表达,利用MAb 6D10对表达产物进行western blot分析,反应性良好.由此表明"FGPRTK"6肽为IBV CK/CH/LDL97 I株的一个线性B细胞抗原表位.表位的保守性分析结果表明,本研究鉴定的表位在各种血清型IBV毒株中均高度保守.本研究结果为进一步研究IBVN蛋白抗原的结构和功能及诊断试剂的研发奠定了基础.