抗鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

摘要

为鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗原表位,本研究将IBV tl/CH/LDT3/03株免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经克隆筛选,得到两株针对IBV核(N)蛋白的单克隆抗体(MAb)6H3和6F9,其染色体数目分别为90条和102条,MAb亚类鉴定分别属于IgG1和IgG2b,轻链均为κ链.对MAb 6H3和6F9的抗原表位进行初步鉴定,将N基因分成8个片段克隆于pGEX-6p-1载体中,转化BL21(DE3)内诱导表达.经western blot分析,MAb 6H3表位的初步定位在aa 80～aa 99,而MAb 6F9表位的初步定位在aa 64～aa 82.而且MAb 6F9还能特异性识别其他5株IBV的天然N蛋白,推测它们含有一个相同的B细胞表位.