核蛋白

摘要： 无POU域八聚体结合蛋白(NONO)是一种能与DNA、RNA和其他蛋白质相互作用的多功能核蛋白,参与了mRNA的剪切、DNA的损伤修复、DNA解螺旋配对等多种细胞生物活动。目前有多项研究已表明,NONO蛋白与多种恶性肿瘤的发生发展过程密切相关,如前列腺癌、大肠癌、膀胱癌、黑色素瘤、肾细胞癌等。基于此,本文就NONO蛋白的结构、生化功能及其与恶性肿瘤的关系进行综述。

摘要： —、醛类消毒剂醛类消毒剂主要包括甲醛、戊二醛。甲醛主要是通过竞争性反应和阻止核蛋白的合成而达到杀灭微生物的作用。甲醛溶液和气体对病毒和细菌、真菌都具有杀灭作用,具有价格低廉、易于保存和使用方便的特点。适用于畜禽舍空气、器皿消毒和病死畜禽的防腐;其副作用是对人畜有刺激性,易引起过敏和中毒。日常消毒中较少使用。

摘要： 核蛋白(NP)是流感病毒的主要结构蛋白,其与RNA依赖性的聚合酶蛋白(PB2、PB1和PA)及vRNA构成核糖核蛋白复合体,参与流感病毒复制过程中的多个阶段.宿主因子着丝粒蛋白V(CENPV)在细胞生命周期中发挥重要作用,但是目前尚未见关于CENPV蛋白与流感病毒NP蛋白相互作用的报道.为研究宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白相互作用机制,本实验利用酵母双杂交技术筛选与NP蛋白相互作用的CENPV,利用酵母回交验证,结果显示CENPV与NP诱饵质粒共同转化Y2H酵母感受态细胞,在DDO、QDO和QDO/X/A 3种营养缺陷型的培养基上均能生长,并使菌落呈现蓝色,与阳性对照结果一致,而阴性对照组在QDO和QDO/X/A培养基上均未观察到菌落,表明在酵母系统中宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白存在相互作用.将pCAGGS-CENPV-Myc(1μg)表达质粒与pCAGGS-NP(1μg)质粒共转染293T细胞,通过免疫共沉淀(Co-IP)检测,结果显示鼠抗NP MAb仅可结合CENPV与NP共转染组中的CENPV,表明宿主蛋白因子CENPV与流感病毒的NP蛋白存在相互作用;进一步利用激光共聚焦试验检测,结果显示在A549细胞中宿主因子CENPV与流感病毒的NP蛋白存在共定位.根据人CENPV序列设计合成CENPV的特异性siRNA,利用RNAiMAX将CENPV siRNA转染A549细胞,48 h后进行细胞活力测定和病毒感染试验,结果显示利用siRNA干扰技术下调CENPV表达后对细胞活力无影响,但可促进流感病毒在A549细胞中的复制.以上研究结果首次证实宿主因子CENPV与流感病毒NP蛋白存在相互作用,并且调控流感病毒的复制.本研究进一步完善了流感病毒NP蛋白与宿主因子的相互作用网络,为宿主因子调控流感病毒复制研究提供参考.

摘要： 目的 获取具有生物活性的狂犬病病毒核蛋白在大肠埃希菌表达系统中高效表达.方法 实验使用密码子优化技术重新编码狂犬病病毒CTN-1株核蛋白基因,人工合成全长基因并克隆至pET-43.1a表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)株中诱导表达,并使用Western blot检测其反应原性.结果 诱导后SDS-PAGE分析显示在相对分子质量50×103处出现明显的表达条带,与预期蛋白质条带大小一致.其中在大肠埃希菌A600为0.5左右,37°C诱导5 h时表达产量最高(约为32.3％).大量表达时核蛋白的表达形式主要为包涵体,后经Ni2+螯合层析纯化,获得纯度为95％以上的目的蛋白.纯化产物经Western blot鉴定,与疫苗免疫小鼠血清呈阳性反应,表明大肠埃希菌表达CTN-1株核蛋白具有生物活性.结论 本实验成功建立了 CTN-1株核蛋白在大肠埃希菌表达系统的高效表达方法,并获得了高纯度目的蛋白,为进一步的临床诊断和新型疫苗制备提供基础资料.

摘要： 本实验通过液相蛋白芯片技术(Flexible MultiAnalyte Profifiling,xMAP)建立了一种禽流感病毒(AvianInflfluenza Virus,AIV)抗体检测方法.主要包括蛋白抗原性分析、xMAP检测方法的优化、特异性分析、灵敏性分析和临床样本检测等内容,研究结果表明所选用的流感病毒核蛋白(Nucleoprotein,NP蛋白)抗原性良好,通过对蛋白包被浓度的优化初步建立了检测禽流感病毒抗体的xMAP方法.经过验证该方法特异性良好,与其他禽病原抗体无交叉反应.xMAP灵敏度高于ELISA方法.批内及批间变异系数均在10％ 以内,稳定性好.检测临床样品与ELISA试剂盒检测的符合率为100％.综上,本研究成功建立了一种检测AIV抗体的xMAP方法.

摘要： PCNP是一种新近发现的含有PEST序列的核蛋白,主要定位于细胞核中,在体内外均可为泛素连接酶NIRF(Np95/ICBP90-like RING figer protein)作用而泛素化降解.PEST结构域是一种富含脯氨酸(Proline,P)、谷氨酸(Glutamic acid,E)、丝氨酸(Serine,S)和苏氨酸(Threonine,T)的肽序列,对于细胞周期和增殖具有调控作用,并且和染色体的稳定、肿瘤的发生以及免疫系统有关.人类恶性肿瘤预后较差,患者生存质量每况愈下,发病机制复杂多变,有研究发现PCNP的表达与PI3 K/AKT/mTOR、JNK和Wnt等肿瘤发病重要信号通路有关,并在一定程度上影响某些免疫细胞、细胞因子的功能和效应分子的表达,触发相关免疫反应,在肿瘤的发病机制中发挥重要作用.主要就PCNP在细胞周期调控、细胞信号转导和肿瘤免疫方面进行综述.

摘要： 本文综述了鹅痛风的特征及其发生机制,指出了鹅痛风的原因,分析了预防鹅痛风用中兽药功能性饲料添加剂的组成成分,提出了鹅痛风的防治措施。

摘要： 目的:研究苎麻叶不同溶剂萃取物对甲型流感病毒(H1N1)的体外抑制作用和抗氧化活性,以扩大苎麻植物的药用部位并开发天然抗病毒、抗氧化药物.方法:取苎麻叶以95％乙醇提取,分别用水加热溶解醇提物浸膏,再以不同溶剂分别萃取,制得苎麻叶石油醚相、三氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相萃取物.考察50～400μg/mL的苎麻叶水相萃取物对犬肾细胞(MDCK)的毒性作用;以利巴韦林为阳性对照,采用甲型流感病毒(H1N1)攻击MDCK细胞,并采用Western blotting法检测相同质量浓度的苎麻叶石油醚相、三氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相萃取物溶液(均为100μg/mL),不同质量浓度的苎麻叶水相萃取物溶液(50、100、200、400μg/mL)以及不同质量浓度的利巴韦林溶液(0.31、0.63、1.25μg/mL)对病毒感染的细胞中核蛋白(NP)表达水平.以维生素C为阳性对照,采用羟基自由基(·OH)清除试验、DPPH自由基清除试验和还原试验考察各相萃取物的体外抗氧化活性.结果:苎麻叶水相萃取物质量浓度在400μg/mL以内时对MDCK细胞无毒性;苎麻叶石油醚相、三氯甲烷相、乙酸乙酯相、水相萃取物质量浓度在100μg/mL时均能显著降低甲型流感病毒(H1N1)感染的细胞中NP蛋白表达水平(P<0.01);而不同质量浓度(50～400μg/mL)的水相萃取物均能显著降低NP蛋白表达水平(P<0.01),且呈一定浓度依赖趋势;其石油醚相和乙酸乙酯相萃取物的抗氧化活性与维生素C较为接近.结论:苎麻叶水相萃取物具有较好的体外抗甲型流感病毒(H1N1)作用;其石油醚相和乙酸乙酯相萃取物表现出较好的体外抗氧化活性.

摘要： 目的：研究狂犬病病毒核蛋白在保护性免疫应答中的作用。方法：RT-PCR获得狂犬病病毒CVS-11株的核蛋白全长基因，并克隆至原核表达载体pET30a(+)，获得重组表达质粒pET30a-N，转染BL21（DE3）菌株，在体外进行核蛋白的表达，Ni2+柱纯化。纯化后核蛋白以氢氧化铝为佐剂免疫Balb/c小鼠，ELISA检测小鼠特异性抗核蛋白抗体，同时进行病毒攻击法以评价核蛋白所诱导的保护性免疫应答情况。结果本研究成功构建狂犬病病毒核蛋白重组表达质粒pET30a-N，并在体外获得高效表达和纯化核蛋白，目标蛋白主要以包涵体形式存在，占菌体总蛋白的35%左右。ELISA检测小鼠血清中抗核蛋白特异性抗体滴度对数的GMT值为 3.81± 0.22。加氢氧化铝佐剂的重组核蛋白免疫小鼠后进行狂犬病病毒CVS株攻击保护率可达41.7%。结论：狂犬病病毒核蛋白获得成功表达和纯化，数据显示具有良好的免疫原性，并可对狂犬病病毒攻击产生一定的保护效果。

摘要： 将狂犬病毒(rabies virus，RV)核蛋白基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中，构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-N，pVL-N与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞，经空斑筛选后成功获得携带有RV核蛋白基因的重组病毒rBmNPV(N)。将获得的重组病毒rBmNPV(N)感染家蚕蚕蛹，双抗体夹心ELISA法检测证明，目的基因在蚕蛹中获得较高水平表达，用蚕蛹表达产物作抗原制备疫苗免疫Ba1b／c小白鼠，免疫动物均产生了特异性抗体，免疫后30 d用狂犬病毒CVS攻毒株攻击，获得了50％的保护。

摘要： 流感病毒核蛋白在流感病毒生命周期中起着重要作用，主要是包裹病毒核酸基因组，为病毒RNA的转录，复制及装配提供必要条件。本研究利用原核表达系统表达A型流感病毒H1N1亚型核蛋白，获得重组蛋白，为流感病毒相关研究打下基础。

摘要： 为了研究禽流感病毒核蛋白在鸡体内所引起的免疫反应，将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中，经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP，将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核细胞，利用间接免疫荧光法检测目的基因的瞬时表达；采用腿部肌肉注射途径将重组子免疫SPF鸡，利用ELISA检测免疫后血清抗NP蛋白抗体效价。实验结果表明，该重组子无论在体外还是体内均能正确表达禽流感NP蛋白，且所表达的蛋白均具有良好的免疫原性。

摘要： 为了研究禽流感病毒核蛋白在鸡体内所引起的免疫反应，将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中，经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP，将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核细胞，利用间接免疫荧光法检测目的基因的瞬时表达；采用腿部肌肉注射途径将重组子免疫SPF鸡，利用ELISA检测免疫后血清抗NP蛋白抗体效价。实验结果表明，该重组子无论在体外还是体内均能正确表达禽流感NP蛋白，且所表达的蛋白均具有良好的免疫原性。

摘要： 我们通过昆虫杆状病毒表达系统成功制备了H5N1禽流感病毒的病毒样颗粒(VLPs)。由HA、NA和M1三种结构蛋白组成VLPS称为VLP3，由HA、NA、M1和NP四种结构蛋白组成VLPS称为VLP4。小鼠免疫实验表明，无论是皮下注射免疫还是滴鼻免疫途径，VLPS都能引起小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫。而VLP4的免疫效果优于VLP3。SPF鸡免疫试验结果表明，VLP4免疫产生的HI抗体水平高于VLP3。攻毒保护实验结果表明，VLP4免疫能针对流感病毒流行株提供100％的保护，而同时VLP3只能提供50％的保护。这些结果表明，NP蛋白促进了VLPS诱导小鼠和SPF鸡产生更强的免疫反应。

摘要： 细胞免疫反应在病毒感染的清除中起了重要的作用。针对保守表位的记忆性T细胞可以抵抗异源病毒的攻击。在本研究中,通过禽痘病毒表达系统对AIVA/Goose/Guangdon/1/96(H5N1)(GD1/96)株NP进行T细胞表位作图。将全长NP分为互相重叠的6段,分别构建含有6个节段和全长的重组FPVs(rFPVs),使用构建的重组rFPVs体外刺激经NP重组DNA疫苗免疫的鸡脾淋巴细胞,分别通过流式细胞术、ELISA和real-time RT-PCR监测刺激后细胞增殖、ChIFN-γ表达和转录的情况,结果显示,我们所获得的五株重组毒rFPlV-NP1、rFPV-NP3、rFPV-NP4、rFPV-NP5和rFPV-NP中,rFPV-NP5能明显刺激活化后细胞的增殖及ChIFN-γ表达和转录,从而确定在AIV GD1/96NP(NP277-421)的羧基端存在至少1个T细胞表位。

摘要： 禽流感病毒(AIV)的核蛋白(NP)基因在A型流感病毒中同源性较高，保守性强，核蛋白具有型特异性，是流感病毒划分为A、B、C型的主要依据。本文从GeneBank下载禽流感病毒NP基因序列，通过比对选取NP基因中较为保守的片断，设计一对引物，通过RT-PCR方法扩增目的片段，用分子克隆方法构建重组质粒，测序后将上述设计的引物扩增序列与AIV各亚型NP基因进行同源性比较，根据同源性大小来判断利用地高辛标记扩增产物制备探针。为禽流感病毒感染禽类动物提供一定的致病机理研究，也为以后预防和治疗该疾病奠定一定的理论基础。

摘要： 本研究发现砷处理人正常膀胱上皮细胞24 h后，细胞内ca2+水平发生了变化，当亚砷酸钠浓度达到4、8和10μmol／L浓度时，细胞内Ca2+水平显著高于对照组，并以10μmol／L剂量组细胞内Ca2+水平最高。说明高剂量亚砷酸钠刺激人正常膀胱上皮细胞，引发钙动员，细胞内钙离子水平持续升高。亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞24h后，细胞核NFATcl蛋白表达水平也显著增高，其增高趋势与细胞内Ca2+水平结果相一致。提示亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞后，Ca2+／CaN／NFATcl信号通路被激活。亚砷酸钠可以通过该信号通路发挥作用，诱导其下游靶基因的转录，调控细胞的生长与分化、血管发生甚至肿瘤发生过程，可能在砷致膀胱癌过程中发挥作用。

摘要： 本研究发现砷处理人正常膀胱上皮细胞24 h后，细胞内ca2+水平发生了变化，当亚砷酸钠浓度达到4、8和10μmol／L浓度时，细胞内Ca2+水平显著高于对照组，并以10μmol／L剂量组细胞内Ca2+水平最高。说明高剂量亚砷酸钠刺激人正常膀胱上皮细胞，引发钙动员，细胞内钙离子水平持续升高。亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞24h后，细胞核NFATcl蛋白表达水平也显著增高，其增高趋势与细胞内Ca2+水平结果相一致。提示亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞后，Ca2+／CaN／NFATcl信号通路被激活。亚砷酸钠可以通过该信号通路发挥作用，诱导其下游靶基因的转录，调控细胞的生长与分化、血管发生甚至肿瘤发生过程，可能在砷致膀胱癌过程中发挥作用。

摘要： 本发明涉及基于作为异源多肽载体的包含非节段负链核糖核酸(RNA)病毒的核蛋白的多聚核糖核蛋白(RNP)的亚单位疫苗平台。本发明还涉及得自至少200个融合蛋白与细胞RNA的组合体的多聚RNP，或者涉及表达这些多聚RNP的重组酵母或酵母裂解物。本发明还涉及制备这些多聚RNP或重组酵母或酵母裂解物的方法。本发明特别涉及它们用作活性成分在体外产生免疫原性组合物或者在需要其的宿主体内引起针对异源多肽的保护性预防或治疗性免疫应答的用途。本发明的重组酵母或酵母裂解物也可以用作表达和载体系统以递送至宿主。

摘要： 提供了检测生物样品中α‑突触核蛋白聚集体存在的方法，其中将生物样品与反应样品混合以形成反应混合物，所述反应样品包含珠粒群体、适合于结合蛋白质聚集体并在与蛋白质聚集体结合时荧光增强的荧光团、和α‑突触核蛋白或其片段或变体，对反应混合物进行照射并同时以间歇式搅拌循环进行孵育，其中孵育期间反应混合物的荧光显著增加表明生物样品中存在α‑突触核蛋白聚集体。诊断α‑突触核蛋白病如帕金森病或路易体痴呆的方法。

摘要： 本发明提供了一种核蛋白的染色试剂盒及应用和核蛋白染色方法，属于生物医药技术领域。本发明提供的核蛋白的染色试剂盒含有多种特异性的染色试剂，能与核蛋白高效、稳定的结合，准确地、特异地参与反应，运用上述染色试剂盒的核蛋白染色方法，可以通过简单的实验步骤，快速实现核蛋白的染色，具有较大的使用价值和社会价值。

摘要： 本公开涉及抗α‑共核蛋白抗体诊断脑中的α‑共核蛋白的升高水平的用途。确切来说，本公开涉及在向测试受试者施用抗α‑共核蛋白抗体或其抗原结合片段之后评价血浆或CSF中的α‑共核蛋白的水平的方法，所述抗α‑共核蛋白抗体或其抗原结合片段可以结合具有足够活性的α‑共核蛋白以改变从脑至血液或从脑至CSF的α‑共核蛋白的净流出。

摘要： 本发明涉及基于作为异源多肽载体的包含非节段负链核糖核酸(RNA)病毒的核蛋白的多聚核糖核蛋白(RNP)的亚单位疫苗平台。本发明还涉及得自至少200个融合蛋白与细胞RNA的组合体的多聚RNP，或者涉及表达这些多聚RNP的重组酵母或酵母裂解物。本发明还涉及制备这些多聚RNP或重组酵母或酵母裂解物的方法。本发明特别涉及它们用作活性成分在体外产生免疫原性组合物或者在需要其的宿主体内引起针对异源多肽的保护性预防或治疗性免疫应答的用途。本发明的重组酵母或酵母裂解物也可以用作表达和载体系统以递送至宿主。

摘要： 本公开涉及抗α-共核蛋白抗体诊断脑中的α-共核蛋白的升高水平的用途。确切来说，本公开涉及在向测试受试者施用抗α-共核蛋白抗体或其抗原结合片段之后评价血浆或CSF中的α-共核蛋白的水平的方法，所述抗α-共核蛋白抗体或其抗原结合片段可以结合具有足够活性的α-共核蛋白以改变从脑至血液或从脑至CSF的α-共核蛋白的净流出。

摘要： 一种禽流感病毒基质蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表达制备方法，属于生物技术领域，特别是涉及一种AIV融合抗原蛋白及制备。本发明提供一种由两种AIV抗原蛋白组成的融合抗原蛋白，能有效检测致病率很高的A型禽流感病毒基质蛋白及核蛋白的抗体的禽流感病毒基质蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表达制备。本发明首先构建质粒pPIC9K－M－Np，然后M－Np蛋白毕赤酵母真核表达及制备。本发明开展了利用毕赤酵母真核表达系统表达制备的M－Np融合抗原蛋白的研究。其表达量高、特异性强、易于纯化、具有完整的空间构象等特点完全符合ELISA快速检测试剂盒的鉴定要求。

摘要： 本发明涉及一种含编码塔城蜱病毒2核蛋白基因的融合质粒、宿主菌及蛋白的制备方法和应用，属于病原检测试剂技术领域。本发明提供了密码子优化后的编码塔城蜱病毒2核蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述融合质粒生产的塔城蜱病毒2核蛋白能在大肠杆菌中大量表达可溶性TcTV‑2‑NP，能与相应的抗体特异性的结合，用于NP抗体的检测时具有较高的敏感性和特异性，具有开发成为检测试剂盒的应用价值。

摘要： 本公开提供了抑制神经系统中α‑突触核蛋白表达的锌指融合蛋白，及使用该蛋白质来治疗帕金森病(Parkinson’s disease)、路易体痴呆(Lewy bodydementia)、多系统萎缩、阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease)及其他神经退行性疾病的方法。

摘要： 本发明公开了一种催生蛋白及RNA具有延长细胞端粒和增殖的核蛋白端粒酶在化妆品中的应用，涉及端粒酶技术领域，旨在深层修复并调理皮肤，延缓皮肤衰老，技术方案是，各组分的重量份配比如下：血清白蛋白为40‑45份、寡肽‑3为2‑5份、RNA钠为30‑40份；制备步骤如下：备料称量、混合搅拌、过滤、杀菌、抽样检测、保存；本发明通过血清白蛋白，能够维持血液胶体渗透压，清除自由基，抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能；RNA钠能够调理皮肤，对坏损皮肤有修复、愈伤效用，延缓皮肤衰老；寡肽‑3能促进皮肤组织生长繁殖、修复和再生，促进细胞代谢和创伤愈合，具有深层修复作用，调理肌肤纹理；通过上述步骤制得的端粒酶，混合充分均匀，杂质少，质量好，保质期长。