基于16S rRNA基因的不同血清型鸭疫里默氏杆菌PCR检测方法的建立

摘要

为建立一种快速诊断鸭疫里默氏杆菌(RA)病的方法,本研究根据NCBI登录的ATCC 11845菌株(CP003388.1)的16S rRNA基因保守序列设计引物,对标准株和疑似感染RA的病料样品进行检测,建立RA PCR检测方法.结果显示,6株RA标准株(包括1、2、10和11血清型)和2个疑似RA感染的病料样品,均能够扩增出698 bp的特异性片段,而鸭大肠杆菌和鸭沙门氏菌扩增均呈阴性.测序分析表明,疑似病料样品中扩增的片段与ATCC 11845菌株相应片段同源性达99.9％.PCR敏感性试验检测显示,其最小检出量为2.3×103 cfu/mL;应用该法对10只RA病鸭的组织样品检测显示,脑组织检出率最高,其次为心血、肝脏和脾,而肠和肌肉呈阴性.同时,PCR法对RA的检出率比细菌分离鉴定法高11.7％.本研究建立的基于16S rRNA基因序列的PCR检测方法,能够检测主要流行于浙江地区的4种血清型RA,具有特异、灵敏和快速的优点.