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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛

召开年：2008
召开地：河南新乡
出版时间： 2008-04-26

主办单位：;中国畜牧兽医学会;;

会议文集：中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集

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1.抗菌肽抗菌活性的研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：抗菌肽是近年来发现的广泛存在于自然界的一类线性阳离子小分子多肽,有着活性强、功能广泛、杀菌谱广等突出特点。研究表明,抗菌肽具有多种抗菌机制,可以通过增加细胞膜的通透性、抑制细胞呼吸、抑制细胞壁合成、抑制外膜蛋白合成、诱导细胞调亡等机制来杀灭细菌。抗菌肽的两亲结构和电性对其抗菌活性有着直接的影响。本文根据当前各种抗菌肽的报道,对不同种类抗菌肽的抗菌活性,以及抗菌肽的主要抗菌机制作一综述。
2.免疫组化技术在检测病原微生物的应用研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：免疫组化是运用抗原-抗体反应及组织化学显色反应来检测抗原和抗原定位的一种方法,在生物科学和医学领域的研究中得到广泛应用。主要介绍免疫组化在检测病原微生物(细菌、病毒、支原体、真菌和寄生虫)方面的研究和应用。
3.疱疹病毒UL33基因及其编码蛋白的研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：疱疹病毒是一类大型双链DNA病毒,是已知感染人类的病毒种类数最多的一个病毒科,也是动物感染病毒种类较多的科。在疱疹病毒中,UL33基因编码的蛋白作为末端酶亚基的组成之一,主要对病毒DNA的裂解和包装起重要作用,其缺失会直接导致成熟病毒的缺失,从而影响感染的能力。本文就疱疹病毒UL33的基因结构、编码蛋白的特点及其蛋白功能的国内外研究进展进行总结,为疱疹病毒UL33基因进一步深入研究提供参考。
4.疱疹病毒UL35基因及其编码蛋白的研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：疱疹病毒为一类具有相同形态学且有较大囊膜的双链DNA病毒,其基因组由特定长区(UL)和特定短区(US)两个共价结合的片段组成,两端为末端重复序列(TR),UL和US连接处有内部重复序列(IR),UL35是位于疱疹病毒特定长区的基因,编码相应的结构蛋白,主要参与病毒粒子的晚期包装。本文就UL35基因的特点,UL35编码蛋白的特点、结构定位、相关功能以及它与衣壳、ATP、病毒DNA、其它蛋白的相互作用等方面进行总结,以期为疱疹病毒UL35基因的深入研究提供有用借鉴。
5.疱疹病毒UL31基因及其编码蛋白研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：疱疹病毒是一类有囊膜的双链DNA病毒,基因组由长节段(L)和短节段(S)组成.UL31基因是基因组独特UL序列中的一个核心基因,具有其型的开放阅读框架,编码一种磷酸化蛋白。该蛋白与UL34蛋白相互作用,定位于细胞核边缘,与病毒核衣壳初期包膜形成有关,对病毒DNA的合成、包装和释放也有一定的作用。本文就UL31基因及编码蛋白的结构特点和基本功能等研究进展进行总结,以期为禽类疱疹病毒UL31基因的深入研究提供指导。
6.疱疹病毒UL32基因及其编码蛋白研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：疱疹病毒为一类具有相同形态学且有较大囊膜的双链DNA病毒,其基因组由特定长区(UL)和特定短区(US)两个共价结合的片段组成,两端为末端重复序列(TR),UL和US连接处有内部重复序列(IR)。UL32是位于疱疹病毒特定长区的基因,在不同疱疹病毒亚科编码不同类型的蛋白,其作用是促进病毒DNA的壳体化,与病毒粒子在细胞质内的成熟有关。本文就疱疹病毒UL32基因及其编码蛋白的特点、亚细胞定位、功能以及与其它切割、包装蛋白的关系作一综述。
7.疱疹病毒UL26.5基因及其编码蛋白研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本文对疱疹病毒UL26.5基因序列特点、编码蛋白结构特点、基本功能、核定位信号、磷酸化作用以及它与ULl9蛋白、UL6蛋白的相互作用等方面的研究进展进行了总结,表明UL26.5基因对病毒衣壳支架的构成、衣壳的装配和成熟以及对UL19蛋白在感染细胞中的正确定位都有重要作用。
8.疱疹病毒胸苷激酶基因的研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：疱疹病毒是一群较大的有囊膜的双链DNA病毒。至今发现的疱疹病毒已经有100余种,国际病毒分类委员会将疱疹病毒科分为甲(Alpha-)、乙(Beta-)、丙(Gamma-)三个亚科,各个亚科中都有许多未分属的病毒,此外还有许多疱疹病毒尚未归入某个亚科。其中伪狂犬病毒(PRV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、单纯疱疹病毒(HSV)等二十余种疱疹病毒的胸苷激酶(TK)基因已被研究过。TK基因是大多数疱疹病毒增殖的非必需基因,是疱疹病毒主要毒力基因之一,也是病毒化学治疗和缺失致弱疫苗的主要靶基因,缺失TK基因的疱疹病毒在神经元中的复制能力极弱。TK基因属于病毒的早期基因,其编码产物胸苷激酶是胸腺嘧啶合成补救途径中所必需的酶,能够将ATP上的v-磷酸转移到脱氧胸苷的5'羟基上,从而生成脱氧胸苷5'单磷酸和ADP。TK通过使胸腺嘧啶磷酸化为dTMP,然后继续磷酸化成为dTTP,参与DNA的合成。
9.动物疱疹病毒基因工程疫苗的研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：疱疹病毒为一类具有相同形态学且有较大囊膜的双链DNA病毒,其感染在全世界非常普遍。疱疹病毒不仅能产生原发性感染,还存在潜伏感染和复发性感染。此外,某些疱疹病毒是哺乳动物和禽类等肿瘤的病原因子,因此防制此病不容小视。疫苗的免疫接种是预防控制该病的主要手段。本文在简单介绍动物疱疹病毒常规疫苗的基础上对动物疱疹病毒基因工程疫苗,包括重组亚单位苗、核酸疫苗、基因缺失疫苗和基因重组活载体疫苗等方面进行了综述,并对动物疱疹病毒基因工程疫苗今后的发展方向作了小结与展望,以期为动物疱疹病毒基因工程疫苗的深入研究提供有用借鉴。
10.提高大肠杆菌可溶性表达重组蛋白的研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：大肠杆菌表达系统是目前基因工程中最常用的重组蛋白表达系统。但由于大肠杆菌表达系统的缺陷,使所表达的蛋白常常形成无活性的包涵体,为此研究者摸索了许多方法来提高重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达。近年来在提高重组蛋白可溶性表达的策略方面取得一定进展。
11.病毒dUTPase研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：脱氧尿苷焦磷酸酶(duTPase)广泛存在于真核、原核细胞和病毒等生物有机体中,通过催化水解脱氧尿苷三磷酸(dUTP),减少尿嘧啶在DNA合成中的错误掺入,降低细胞中的dUTP/dTTP比例,保证DNA复制的正确性和顺利进行。病毒编码的dUTPase具有种属特异性,且与病毒的毒力和高效复制密切相关。本文就dUTPase的生物学功能、分类特征、表达调控、分布定位及病毒dUTPase功能的研究进展进行了概述,为深入开展dUTPase功能研究提供理论基础。
12.细菌毒力岛的研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：毒力因子((virulence factors)也称致病因子是某些细菌对环境作出相应反应而表达的特定的产物，而这些毒力因子(如菌毛、毒素、酶等)可以直接导致细菌的致病性并在致病过程中发挥着不同的作用。编码毒力因子的毒力基因可以是转座子的一部分，或是细菌内的质粒或噬菌体分别编码。也可以足位于细菌染色体上的某些特殊位点或某一特定区域一称为“毒力岛”或“致病性岛”(PAI)。“毒力岛”是近年来在医学细菌学领域对细菌致病机制的研究中出现了一个新概念并具有重要的研究价值。本文综述了几种细菌的毒力岛的结构和在细菌致病过程中的作用,并探讨了毒力岛与细菌进化的联系。
13.细胞凋亡发生机制的研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：细胞凋亡(apoptosis)是一种基因调控下的细胞主动死亡过程,是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,参与许多疾病的病理过程,具有重要的生物学意义。本文概括介绍了近年来有关细胞凋亡发生机制的研究进展,以期为有关研究提供参考。
14.传染性法氏囊病毒的生物学特性研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：由法氏囊病毒引起的免疫抑制病给养鸡业带来严重危害,因此其生物学特性和分子生物学特性的研究对该类型病的预防和治疗有着重要的意义。这也有待于今后更进一步深入研究。
15.猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究的概况
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：猪繁殖与呼吸综合征是一种引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状及高死亡率的传染病。该病在世界各养猪国家广泛流行,给养猪业造成严重经济损失,因此受到国内外学者的高度重视,对此病的研究特别是对其疫苗的研究正日益受到关注。文章就猪繁殖与呼吸综合征病毒的灭活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗的研究进展做以详细的阐述。
16.鸭疫里默氏杆菌分子生物学研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本文对鸭疫里默氏杆菌(RA)的DNA指纹图谱、携带质粒特性、16S r DNA特性、免疫原蛋白、分子检测方法、亚单位疫苗等分子生物学方面的研究进展进行了综述,对RA的基因缺失苗、检测试剂盒、全基因组的获得,致病机理和耐药机制等方面进行了展望。
17.金黄色葡萄球菌的分子生物学分型研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：目前有多种方法用于金黄色葡萄球菌的分型,这些方法在临床诊疗和流行病学的调查中起到了重要的作用,金黄色葡萄球菌的这些分型方法可归为两大类,一是表型分型,二是基因分型。表型分型包括噬菌体分型、荚膜分型、细胞表面蛋白电泳(免疫印迹)和多位点酶电泳等,这些分型方法在金黄色葡萄球菌的分型历史上起了重要的作用,有的至今还在使用,如噬菌体分型；但由于这些方法是基于细菌的表型,而且存在一些缺点,比如分型率低、重复率差、以及分辨能力不强等,因此目前只作为分型的补充方法。随着分子生物学时代的到来，依赖于细菌DNA的分型方法更加受到关注,这些方法相对于表型分型方法来说,有分型率高、重复性好、以及分辨率强等优点而被广泛的使用。金黄色葡萄球菌的分子生物学分型方法也经历了一个发展的阶段,最初的分子生物学分型方法主要是从比较细菌质粒或是质粒图谱来进行分型的，进而比较细菌染色质DNA的限制性内切酶图谱,第二代基因分型方法包括使用特异性的基因探针进行杂交(Southern blot hybridization)、高压脉冲场凝胶电泳(PFGE)，以及基于聚合酶链反应(PCR)的方法,如随机引物扩增多态性(RAPD)、限制性片段长度多态性(RFLP)等。
18.沙门氏菌外膜蛋白分子免疫学研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：外膜蛋白是沙门菌属抗原的重要组分之一,正如细菌的荚膜、鞭毛、菌毛等具有许多功能一样,OMP也具有很重要的功能。外膜蛋白具有直接与机体免疫系统接触的机会,有较强的免疫原性,能够诱导机体产生免疫应答。随着分子免疫学技术和基因检测手段的发展,对沙门菌属的外膜蛋白的研究也日趋成为热点。
19.假型病毒载体研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：假型病毒(Pseudotyped virus)是指包被其它囊膜病毒糖蛋白的病毒颗粒,但其细胞和组织嗜性由其包被的糖蛋白决定。研究表明假型病毒是一种新型的基因转移载体,具有非细胞周期依赖的整合特性、比原病毒更容易浓缩成高滴度、宿主范围广、可安全及高效地转染静止细胞等优点,这为解决目前基因治疗中的关键问题--载体系统,提供了新的途径,因此本文就将假型病毒载体的最新研究进展做一综述,以供参考。
20.介导RNAi的病毒载体研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：RNA干扰(RNAi)是由内源微RNA(miRNA)或外源小干扰RNA(siRNA)引起靶基因沉默的基因调控方式。由于RNAi强大、特异的基因调控能力,现已广泛应用于基因功能和人类疾病模型的研究,包括药物靶标的筛选、候选药物的潜在副作用分析、基因治疗的测试和功能缺失筛选等。然而,目前制约RNAi广泛应用的一个关键因素就是如何将完好siRNA送入靶细胞或靶组织。近年来,介导RN,Aj的病毒载体取得了很大的研究进展--转染效率大大提高,实现了特定的靶组织或细胞内长期、稳定、可监控、可调节和高效的RNAi,避免或减小了RNAi引起的毒副作用,为RNAi的进一步应用奠定了基础,本文将根据各载体的特点就这方面的最新研究进展做以介绍,以供参考。
21.CPG-DNA免疫佐剂作用机理及应用前景
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：CpG-DNA是一些具有免疫激活功能的以未甲基化的CpG基序(CpG motif)为核心的DNA序列,它包括含CpG基序的人工合成的寡聚脱氧核苷酸自然界中细菌、病毒、无脊椎动物等低等生物的基因组DNA。随着对CpG基序的DNA和寡核苷酸免疫学特性的深入了解,人们对CpG特征结构在DNA免疫学中的重要作用有了逐步的认识,并在DNA疫苗、肿瘤免疫、病毒免疫等方面进行了临床应用。本文就CpG的特征结构、免疫活性、佐剂效应以及应用前景作一简要介绍。
22.新型佐剂研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：佐剂的种类繁多,其增强机体免疫应答的机理各不相同,可以增强抗原的免疫原性、免疫应答速度及耐受性,可刺激细胞介导的免疫,随着亚单位疫苗、重组疫苗、合成多肽疫苗等弱免疫原性疫苗的开发研究,原有的免疫佐剂已不能满足新型疫苗飞速发展的需要,寻找一些活性高而副作用低的新型免疫佐剂就显得更为迫切。
23.禽抗微生物肽的结构、分布及活性研究进展
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：抗微生物肽是生物体产生的一种具有抗微生物活性的多肽,具有抵抗原生动物、真菌、病毒、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的活性,不易产生耐药性,有取代传统抗生素的发展趋势。众多学者对禽类抗微生物肽进行了大量的研究,从禽类中陆续分离到20多种新的抗微生物肽,本文主要综述了禽抗微生物肽的结构、分布及活性研究进展,为禽抗微生物肽的进一步探索研究奠定基础。
24.集约化畜禽养殖动物福利及环境性疫病
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：集约化动物生产过程中，动物福利不能保障，直接影响到动物健康和生产性能的发挥。环境性疫病和气源性传染病应当成为现代集约化动物生产疫病防制的重点。如何改善禽舍的环境生态质量，加强动物保健，直接关系到养殖业的效益和发展问题。本文就集约化畜禽养殖动物福利及环境性疫病进行介绍。
25.柔嫩艾美耳球虫表面抗原Sag10基因的克隆及在昆虫杆状病毒表达系统中的表达
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：提取Eimeria tenella北京株第二代裂殖子总RNA,根据sag10基因序列设计引物,应用RT-PCR技术扩增得到Eimeria tenella表面抗原基因sag10。该球虫表面抗原基因全长708bp,编码236个氨基酸。其中有7个核苷酸与报道序列(Genbank AJ586552)有差异,涉及4个氨基酸。将sag10与转化载体pFastBac-HIS8PP连接,构建了pFastBac-sag10表达质粒,转化大肠杆菌DH10 Bac后纯化得到病毒表达载体,转染Spodoptera frugiperda(Sf21)昆虫细胞后,获得的阳性重组杆状病毒,可在昆虫细胞中表达出约35kDa的抗原蛋白SAG10。
26.鸭疫里默氏杆菌Ⅰ型磷酸二酯酶基因的发现及其分子特征分析
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：以兔抗鸭疫里默氏杆菌(RA)阳性血清对RA血清1型CH-1株表达型DNA文库中已通过蓝白斑筛选的一个阳性克隆进行原位杂交筛选。经过5次免疫筛选后,阳性斑经过体内删除、噬菌粒经酶切分析和序列测定,得到一段4434bp的插入DNA片段。运用NCBI的BLASTN、BLASTP、ORF Finder、Conserved Domains、EMBL的FASTA等程序对其中一个命名为ORF1689的开放阅读框架进行了全面的生物信息学分析。结果显示ORF1689起始密码子上游存在核糖体结合位点,完整ORF含1689bp,编码562 aa,其编码蛋白的理论分子量为59.5kD,等电点为5.82。ORF1689具有phosphodiest蛋白家族的保守区域,与丙杆菌属的Caulobacter sp.K31、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.)、Sphingopyxis alaskensis和Novosphingobium aromaticivorans的Ⅰ型磷酸二酯酶基因的氨基酸序列同源性分别为49.283%、38.716%,38.693%和38.313%,表明该基因是一种新的Ⅰ型磷酸二酯酶基因。该研究结果对阐明Ⅰ型磷酸二酯酶的生物学功能和RA的生理特性与致病机理提供了理论基础和实验数据。
27.猪圆环病毒2型ORF2主要抗原区基因的克隆与序列分析
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV-2)的核酸序列并参照表位基因预测结果,设计了1对引物,从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料和经PK15盲传的培养物中扩增出了ORF2表位基因,将其克隆到pMD18-T载体上,筛选获得了重组质粒pMD18-T-ORF2.对此基因片段进行测序分析结果表明与GenBank已提交的序列同源性为98%～99%。
28.NDV HN基因的毕赤酵母表达及免疫原性分析
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：新城疫病毒(NDV)是一种溶癌病毒,可在肿瘤细胞内增殖、抑制并裂解肿瘤细胞。研究发现,NDV能够抑制人的消化道肿瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞瘤、淋巴瘤、神经母细胞瘤、肉瘤等恶性肿瘤。随着对NDV抗肿瘤机制的不断探索,证明NDV的包膜糖蛋白血凝素-神经氨酸酶(HN)是NDV抗肿瘤的功能性蛋白,可以水解细胞表面唾液酸,使肿瘤细胞表面抗原充分暴露,增强肿瘤细胞的免疫原性,增强免疫监视细胞的识别和杀伤作用,引起人和动物肿瘤细胞的凋亡。但对马立克氏病等家禽肿瘤细胞有无溶瘤作用及作用程度如何,目前国内外尚未见相关报道。本研究构建了分泌型重组表达载体pPICZαA-HN,使HN基因整合到酵母染色体中,实现了HN基因在毕赤酵母中的高效分泌表达,为探讨HN对马立克氏等家禽肿瘤性疾病的抗肿瘤作用及作用机制,对马立克氏等家禽肿瘤疾病的防控及人类癌症的生物性治疗具有重要的理论和实际意义。
29.禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中表达的研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本试验根据GeneBank已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计一对IBVS1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5'端不含信号肽序列,3'端添加了终止密码子的IBV S1基因表达片段。用限制性内切酶SnaB Ⅰ和Not Ⅰ将S1基因和裁体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl Ⅱ将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His+Muts。将重组菌株在1%的甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析,结果表明,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76KD,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5%。本研究表达的IBV S1蛋白可作为制备IB诊断抗原、基因工程疫苗的基础材料,对IB的诊断防治有重要的学术价值和应用价值。
30.新城疫病毒洛阳分离株HN基因真核表达载体的构建
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本研究采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从新城疫病毒洛阳分离株中扩增出HN基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3真核表达载体上,构建pcDNA3-HN重组质粒,通过用PCR扩增、酶切电泳分析的方法对重组DNA进行鉴定。结果表明本实验成功构建了新城疫病毒洛阳分离株HN基因真核表达载体。
31.肌肉注射不同剂量鸭α-干扰素基因疫苗免疫鸭抗鸭瘟强毒人工感染的研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：将本实验室构建的鸭α-干扰素基因疫苗(pcDNA-SDIFN吨)分别按每只50、100、200 μg3个剂量肌肉注射免疫北京鸭,以PBS、空载体质粒peDNA3.1(+)和鸭瘟弱毒疫苗为对照,免疫15 d后分经皮下、滴鼻,口服三个途径人工感染0.5 LD50鸭瘟强毒(含病毒DNA拷贝数为3.524×104),统计发病死亡情况,于攻毒后2 h、6 h、12 h、24 h、3 d、6 d、9 d、14 d、22 d、26 d、33 d和40 d采全血,同时取死亡鸭的各组织器官,采用实时荧光定量PCR对鸭瘟病毒在鸭外周血中的动态变化和在各组织器官中的分布及含量进行检测。结果：①三个剂量pcDNA-SDIFN-α和鸭瘟弱毒疫苗都对鸭产生良好保护作用,免疫鸭未发生死亡；而PBS和空载体对照组3只鸭中有1只鸭死亡,死亡鸭心、肝、脾、肾、胰和各段肠管中均检测到鸭瘟病毒DNA且其含量大于pcDNA-SDIFN-α免疫鸭外周血病毒DNA含量。②pcDNA-SDIFN-α肌肉注射免疫组鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量比PBS和空载体对照组低,差异显著,在24h前都低于弱毒疫苗免疫组,差异不显著,攻毒初期(2h),200 μg免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量最低,100μg次之,50μg最高。三个剂量pcDNA-SDIFN-α肌肉注射免疫鸭全部存活,PBS和空载体免疫组分别有13/27和10/27只死亡。病死鸭的脾脏、十二指肠、空肠、盲肠和直肠是鸭瘟病毒DNA含量较高的组织器官。研究表明,pcDINA-SDIFN-α肌肉注射免疫鸭后能产生一定的抗鸭瘟强毒感染的作用,并在攻毒初期表现出一定的量效关系。
32.四川白鹅白细胞介素-2基因的克隆及遗传进化分析
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：参照GenBank中发表的鸭IL-2基因保守序列,设计了一对引物,采用RT-PCR技术从ConA刺激的四川白鹅外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出了鹅IL-2基因,并进行了克隆和测序。结果显示鹅IL-2基因全长468bp,含有一个441bp的ORF区,编码146个氨基酸.生物学软件分析表明该序列编码的氨基酸序列中有4个磷酸化位点,1个糖基化位点,含有21个氨基酸残基组成的信号肽。同源性分析表明四川白鹅IL-2基因与鸭、鸡和火鸡IL-2核苷酸及氨基酸序列同源性分别为92.2%、77.5%、78.2%和85.8%、65.5%、64.1%,而与其它种属的哺乳动物及啮齿类动物(如人、猴、大鼠、牛、马、猪、猫、小鼠、兔和鹿)的IL-2基因的核苷酸和氨基酸同源性分别低于45%和28%,进化树分析也表明四川白鹅IL-2基因与鸭和鸡具有较近的亲源关系。
33.鹅细小病毒VP3基因与鹅白细胞介素-2c基因分泌性融合表达载体的构建及在乳酸杆菌中的表达
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：首先通过酶切连接和PCR方法将信号肽SP基因与鹅细小病毒VP3基因连接,然后再利用酶切连接的方法通过在引物上加上一个由GGSGGSG 7个氨基酸组成的短肽将SP-VP3基因与鹅白细胞介素-2成熟蛋白基因IL-2c连接,从而构建成了SP-VP3-IL2c的分泌性融合蛋白基因。将该融合基因连接到乳酸杆菌表达载体pMJ67中,获得了重组的分泌性表达载体pMJ-SP-VP3-IL2c,通过电转化方法,将其转化到乳酸杆菌L.casei。SDS-PAGE、Western-blotting和MTT试验表明融合蛋白在该体系中成功分泌性表达,所表达的融合蛋白对GPV具有较好的反应原性,IL-2c蛋白具有生物学活性。
34.猪链球菌的生化分群和药敏试验研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：从广东某地区猪场的13份疑似猪败血性猪链球菌病、猪链球菌性脑膜炎和猪淋巴结脓肿猪链球菌病的病料中,分离纯化得到10株链球菌。通过对培养特性、形态特征、染色特性和生化特性等的观察判断,确定C群兽疫链球菌3株,D群猪链球1株,E群链球菌4株。通过药敏试验,10株细菌对先锋Ⅵ和恩诺沙星的敏感度最高；其次是阿莫西林、氯霉素、环丙沙星、青霉素、多粘菌素B、红霉素；链霉素、阿米卡星、卡那霉素、林可霉素、新霉素、庆大霉素等低敏或不敏。以平板法(PA)测定链球菌的溶血特性,将链球菌接种于5%绵羊鲜血平板,37°C培养48 h后观察；根据菌落周围出现溶血圈的情况进行判断,结果全部分离菌株中9株为β溶血,1株为γ溶血。在致病性动物试验中,接种分离株的小白鼠均死亡,而对照小鼠一切正常,证明了分离株的致病性。
35.致病性大肠杆菌的分离和鉴定
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：猪大肠杆菌病是由埃希氏大肠杆菌感染引起的一类猪的传染病。目前已有173个O抗原,99个K抗原,56个H抗原,引起各种动物败血癌、幼畜腹泻、家禽卵巢炎、腹膜炎等。本实验分别收集广东某大型猪场2003-2006年四年内该猪场大肠杆菌病发病猪样本13个,进行分离和分析鉴定。以了解流行于该场的大肠杆菌的主要类型及其变化,同时了解其耐药性的变化,为研制流行于该地区养猪场大肠杆菌疾病的特异疫苗与用药提供参考依据。
36.肌肉注射重组噬菌体疫苗在鸭体内分布情况研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本实验的主要目的是检测重组T4噬菌体经肌肉注射以后,在鸭体组织器官的分布和存留情况.首先,用小量的液体培养基培养重组噬菌体T4-VP2,再通过扩大培养、浓缩后获得滴度为2.81×1010个/ml的重组噬菌体T4-VP2。然后,用重组噬菌体T4-VP2进行动物实验。12只5d龄的小鸭分为2组:A组6只,为肌肉注射组,每只小鸭注射250uL的重组噬菌体；B组6只,为空白对照组,不作任何处理。分别在处理后第1、2、3 h及第2-10 d取小鸭粪便,在处理后的第10 h和1、3、5、7、9 d剖杀小鸭,取出内脏,进行噬菌体检测,并对分离的噬菌体进行PCR鉴定。实验结果表明重组T4噬菌体能很好地进入小鸭的血液循环系统,在鸭的心、肝、脾、肺、肾等组织器官和小肠内容物、血清中都有存留,而且它在这些部位的存留时间各不相同,最短的有3d,最长的有7d。这些结果初步反映出其作为新型基因工程活疫苗的可能性,为研制高效、廉价的活疫苗提供有效数据和实验基础。
37.特异性DNA序列建立种特异性FQ-PCR快速检测肠炎沙门氏菌
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：根据肠炎沙门氏菌(SE)种特异性DNA序列,设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针,首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)诊断方法。该法在SEDNA含量为9×108～9×104copies有较好的线性关系；检测SEDNA模板的灵敏度为4copies/μL,检测SE细菌数的灵敏度为6 CFU/mL；特异性试验表明只对SE基因组呈阳性反应。分别应用该技术和传统细菌分离法检测60份来自人工感染鸭、小白鼠和肉兔的心、肝、脑和直肠粪便,结果显示两种方法对心、肝、直肠粪便的阳性检测结果符合率为100%,而FQ-PCR对脑的阳性检测率极显著高于细菌分离。研究结果表明,该方法快速、灵敏、特异、重复性好且能实时定量检测,可用于SE分离鉴定、SE感染疑似病例检测、SE体内动态分布规律研究及其分子流行病学调查。
38.肠炎沙门氏菌种特异性PCR及对感染鸭快速检测的研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：肠炎沙门氏菌(SE)感染是一种重要的人畜共患病,传统鏊定距的方法尚存在不足,因此有必要建立一种检测该菌的特异性PCR方法。根据GenBank登录的SE种特异性DNA序列,设计合成了一对能特异性扩增293bpDNA片段的引物,首次建立了SE的种特异性聚合酶链式反应(PCR)诊断方法。该方法能特异性扩增；检测SE的最低DNA模板量为50pg/mL,最少检测到的细菌数为19CFU/mL.对10只SE人工感染死亡雏鸭的心、肝和粪便的检测结果与细菌分离的结果符合率为100%,而对脾、脑、法氏囊的检测阳性率极显著高于细菌分离率；应用该技术对临床送检的228只疑似SE感染死亡鸭病例检测结果也显著高于细菌分离法。研究结果表明,建立的PCR方法检测SE具有较好的特异性和敏感性,比传统的细菌分离鉴定更加快捷、准确,可用于SE分离鉴定、SE感染疑似病例的检测及其分子流行病学调查。
39.鸭致病性大肠杆菌的外膜蛋白型及外膜蛋白基因A(ompA)的序列分析
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：测定了从我国西南三省(市)分离到的130株鸭病原性大肠杆菌外膜蛋白型(OMP型),其中O93、O92、O78和O76优势血清型53株,O46等30个其它血清型分离株77株,这些分离株共产生了4个OMP型,其中OMP-1型81株,占62.3%(81/130),覆盖O93、O92、O78和O76等29个血清型,占85.3%(29/34),为主要OMP型；根据Genbank中大肠杆菌K-12外膜蛋白A基因(ompA)的核苷酸序列设计引物,从9株优势血清型和1株O46血清型的鸭大肠杆菌中分别扩增得到外膜蛋白A基因,进行序列测定及分析,发现优势血清型9株个菌株的ompA均由由1171个碱基组成,均只有1个大的开放性阅读框(ORF),长1053bp,编码由350个氨基酸组成的前外膜蛋白A(pro-OmpA),前19个氨基酸残基组成信号肽,成熟的OmpA由331个氨基酸残基组成；O46菌株的开放性阅读框全长1041bp,在736bp～747bp的地方缺失了12个碱基,成熟的OmpA由327个氨基酸残基组成；10个鸭致病性E.coli的ompA基因序列其核苷酸序列高度同源,达95.8-100%。
40.规模化鸭场鸭致病性大肠杆菌的血清型鉴定及其相关毒力基因分子流行病学调查
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：对规模化养鸭场患典型大肠杆菌败血症雏鸭分离的282株致病性大肠杆菌(E.coli)鉴定出210株(包含37种血清型),其中O93、O78、O92、O76占43.8%(96/210)为优势血清型,O46、O32&O93混合型、O60&O93混合型为首次从鸭群中分离到。应用PCR结合核酸序列测定对210株致病性E.coli(鸭大肠杆菌病分离株)和28株健康雏鸭泄殖腔拭子分离的E.coli(临床健康鸭大肠杆菌分离株)进行包括强毒力岛(HPI)中的鼠疫菌素受体基因(fyuA)和铁调节蛋基因(irp2)、Ⅰ型菌毛必须蛋白基因(fimC)、P型菌毛结构基因(papA)和血清耐受基因(iss)基因的检测,结果表明:fyuA、irp2、fimC、papA和iss基因在鸭大肠杆菌病分离株的携带率分别为41.0%、43.3%、92.9%、97.6%和96.7%,在临床健康鸭大肠杆菌分离株的携带率分别为21.4%、25.0%、92.9%、100%和92.9%,患病鸭和临床健康鸭大肠杆菌分离株Iss、Ⅰ型菌毛和P型菌毛基因携带率差异不显著,但P型菌毛基因的携带率均显著高于其他宿主(鸡、猪和人)源E.coli；HPI毒力岛在鸭源E.coli中分布较广,其携带率表现为鸭大肠杆菌病分离株极显著高于临床健康鸭大肠杆菌分离株。HPI毒力岛的携带率与菌株的致病性呈明显的正相关,与O78等特定的血清型有一定的关系。鸭大肠杆菌病分离株有37.6%(79/210)同时携带fyuA、irp2、fimC、iss和papA2基因,极显著高于健康鸭大肠杆菌分离株14.3%(4/28)。
41.基于鸭疫里默氏杆菌16SrRNA PCR检测方法的建立和应用
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：根据GenBank中鸭疫里默氏杆菌(RA)16SrRNA基因序列设计特异性引物,建立了基于16SrRNA鸭疫里默氏杆菌PCR检测方法。以建立的PCR方法对RA、大肠杆菌、沙门氏菌、鸭源金黄色葡萄球菌、两双歧杆菌、短乳酸杆菌、屎肠球菌和短小芽胞杆菌进行检测,结果只有RA DNA能扩增出844bp的特异条带,其他细菌的DNA不能扩增出任何条带；从凝胶中回收DNA条带,测序结果与GenBank中RA相应序列完全一致。对不同稀释度的RA DNA样品进行扩增,PCR对RA DNA最小检出量为22pg,最少检出RA 80CFU/ml。以该PCR方法对可疑为RA的临床病料和菌株进行检测和鉴定,结果与细菌分离鉴定吻合率为100%。表明本研究所建立的基于16SrRNA的RA PCR方法具有快速、灵敏,特异的优点,可用于RA感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定。
42.新乡地区兔巴氏杆菌的分离与鉴定
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：从新乡地区发病或死亡兔的脑、心血、肝、脾等脏器中分离病原菌,经形态学检查、生化试验、动物试验、分离菌被鉴定为多杀性巴氏杆菌。药敏试验表明,分离菌株对氟苯尼考、磺胺六甲氧嘧啶、头孢噻呋等药物较为敏感。
43.孔雀念珠菌病的诊断与治疗
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：念珠菌是一种条件性致病菌,能感染多种禽类,是南方养禽场的一种常见病。龙岩市某孔雀饲养场因饲喂霉变的饲料,导致4月龄的孔雀发生念珠菌病,出现口腔、咽喉、食道、嗉囊粘膜出现灰白色的假膜、溃疡灶,嗉囊粘膜增生、增厚。通过实验室血清学检测、微生物分离培养等实验室诊断确诊该病为念珠菌病,应用硫酸铜500～700ppm饮水,病情得以控制,同时还应用抗念珠菌卵黄抗体与硫酸铜进行了对比治疗试验,证实二者的治疗效果确实。
44.鸭病毒性肝炎病毒在人工感染雏鸭体内侵染规律的研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：肌注、滴鼻和口服途经感染雏鸭,建立疾病模型,利用间接免疫过氧化物酶染色方法对感染后不同时期雏鸭组织石蜡切片中的鸭肝炎病毒进行检测。结果显示:不同途径感染雏鸭DHV后,病毒在受检样品中出现的顺序有差异。肌注组:肝脏、脾脏＞肾脏、十二指肠＞胰腺、肌肉、空肠＞心脏、胸腺、法氏囊、哈氏腺、回肠、盲肠、直肠＞肺,脑；口服组:肝脏＞脾脏、肾脏＞胰腺、胸腺、哈氏腺、法氏囊、肌肉、十二指肠、空肠、回肠、直肠＞盲肠＞心脏,肺脏＞脑；滴鼻组:肝脏＞脾脏、肾脏、肺脏＞胰腺、法氏囊、十二指肠、空肠＞胸腺、哈氏腺,肌肉、回肠、盲肠、直肠＞心脏、脑.阳性组织细胞浆内均出现了ⅡS染色的特异性棕黄色产物。由此表明,鸭肝炎病毒在感染后,广泛分布于雏鸭的各种组织器官,并主要侵害肝、睥、肾、胰及腿部肌肉,继而引起相应的病理变化,肌注组病毒的检出时间明显早于滴鼻组和口服组。
45.雏鹅新型病毒性肠炎病毒强毒株适应鸭胚成纤维细胞及其增殖特性研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：为了获得适宜雏鹅新型病毒性肠炎病毒(NGVEV)生长繁殖的细胞系,本文开展了NGVEV强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)进行适应性培养和增殖特性研究。结果表明:NGVEV强毒株经尿囊腔途径接种10日龄鸭胚4代,取尿囊液接种DEF,F1代无明显细胞痛变；F2代于72～96h在DEF上出现颗粒状缺失、脱落,但无典型蚀斑出现；F3代于96-120h形成大小不等、圆或椭圆形的典型蚀斑；F5代以后NGVEV可稳定适应于DEF生长,典型CPE出现于48-72h。将适应DEF的NGVEV感染DEF细胞后经超薄切片及电镜观察,可见典型的腺病毒粒子,病毒粒子大小为70-90nm.NGVEV在DEF上的TCID50逐渐随着传代次数增加而增高,由第1代的101.23增加到第8代的108.02,最高毒价出现于96-144h.96-120h是收获病毒的最佳时间。
46.雏鹅新型病毒性肠炎病毒强毒致鸭胚成纤维细胞凋亡初探
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：采用H.E染色光镜观察法、透射电镜观察法和Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜观察法,联合研究雏鹅新型病毒性肠炎病毒(NGVEV)诱导鸭胚成纤维细胞(DEF)发生凋亡的特征变化。结果表明:NGVEV感染24～48h的DEF细胞形态学特征与对照组差别不明显；72h,H.E染色可见少量感染细胞出现细胞凋亡的形态改变,但电镜下可观察到以宿主细胞浓缩、核碎裂、染色质凝聚等为特征的不同于对照组细胞的典型凋亡的形态学改变,Annexin V-FITC/PI双染出现少量胞核不被PI红染而质膜被Annexin V-FITC绿染的早期阶段的凋亡细胞.96-120h,感染细胞H.E染色出现以细胞的核浓缩、碎裂和核内染色质颗粒化为特征的典型凋亡细胞形态,电镜下可进一步观察到核碎裂后经由质膜包襄形成的不同形状的凋亡小体,而经Annexi V-FITC/PI双染可观察到不同凋亡阶段的细胞,包括早期凋亡细胞、Annexin V-FITC高染而PI低染的中期凋亡细胞以及Annexin V-FITC和PI均高染的晚期凋亡细胞或死亡细胞。研究初步表明NGVEV能够诱导DEF发生细胞凋亡,凋亡的发生有利于已经成熟NGVEV子代病毒粒子的释放和扩散。
47.雏鹅新型病毒性肠炎病毒强毒在感染鸭胚体内形态发生学和宿主细胞超微病理学研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本文将雏鹅新型病毒性肠炎病毒(NGVEV)强毒CH株经尿囊腔途径人工感染10日龄鸭胚,应用透射电镜和超薄切片技术研究病毒在宿主细胞内的形态发生及各组织器官的超微结构变化。结果表明:感染后不同时间剖杀及死亡鸭胚的尿囊膜、肠、心、肝、脑和肌胃组织器官中,均观察到60～70nm的病毒粒子。病毒粒子主要是通过与细胞膜融合而进入细胞浆内,然后在细胞核内进行复制和装配。最后病毒粒子通过核膜和细胞膜破裂的方式被释放。病毒侵害的主要靶细胞包括鸭胚尿囊膜上皮细胞、肠上皮细胞、肠道平滑肌细胞、成纤维细胞、肝细胞、肌胃粘膜上皮细胞和心肌细胞等,表现为细胞核内外膜间隙严重扩张,细胞质整体结构严重空化。病毒侵害的主要靶细胞器包括粗面内质网和线粒体,表现为粗面内质网的扩张呈囊状；尿囊膜上皮细胞的线粒体出现固缩和异常聚集变化而其他组织细胞的线粒体均表现为肿胀和嵴断裂、消失。本实验还发现NGVEV可诱导宿主细胞发生严重的细胞凋亡现象,表现为细胞皱缩,胞核内染色质密度增高,核固缩成一个或数个团块凝聚在核膜周边,胞浆浓缩深染并形成凋亡小体。
48.鸭Ⅰ型疱疹病毒TK基因的发现及其分子特性
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：通过对本实验室构建的鸭Ⅰ型疱疹病毒(duck herpesvirus type-1)DNA基因文库的重组质粒DNA序列测定,得到一段1077bp的完整ORF,经过生物信息学分析属于胸苷激酶(TK)基因。设计引物对该基因进行PCR扩增并克隆到pMD-18-T载体上,转化宿主菌DH5α,提取阳性重组质粒进行PCR、酶切鉴定并测序证明本研究获得了DPV TK基因。利用生物信息学软件GENSCAN、ProtScale、SignalP2.0、Scansite、TMpred、PROSITE、在线Predictprotein等对该基因分析表明DPVTK基因具有疱疹病毒的典型特征,含有ATP结合结构域和核苷酸结合结构域两个功能结构域,且该基因具有与功能相关的磷酸化位点和氨酰化位点,编码的多肽链中亲水区占据区域大于疏水区域,是一种膜外蛋白。利用DNAstar软件分析DPV TK基因与其他疱疹病毒TK基因序列同源性并绘制系统进化树发现DPVTK基因与禽类疱疹病毒(α-疱疹病毒)的进化关系最近。
49.小鹅瘟病毒VP3基因疫苗的构建及其诱导小鼠和鹅中和抗体初报
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：PCR扩增小鹅瘟病毒(Goose Parvovirus,GPV)CHv株VP3基因并克隆入pMD 18-T-Simple载体,亚克隆正向插入到真核表达质粒pcDNA3.1(+)CMV启动子下游多克隆位点,经PCR和HindⅢ与BamH Ⅰ双酶切鉴定表明成功构建了GPV VP3基因疫苗(pcDNA3.1-GPV-VP3)。该疫苗以200μg/只肌注免疫Balb/c小鼠和鹅,同时分别设肌注PBS和pcDNA3.1(+)作为对照,于免疫后第30、45、60、75、90、105天应用鸭胚原代成纤维细胞(DEF)进行微量中和试验检测小鼠和鹅血清抗100TCID50 GPV的抗体效价。结果表明,pcDNA3.1-GPV-VP3免疫小鼠第30天可检测到抗GPV的中和抗体,抗体效价缓慢上升至90天达到高峰(平均1:135.8)后下降,105天仍高于75天；免疫鹅的中和抗体效价呈现与小鼠类似的规律,第90天达到高峰(平均1:98.5)。因此,pcDNA3.1-GPV-VP3具有良好的免疫原性,肌注免疫小鼠和鹅后能够诱发产生抗GPV的中和抗体,有进一步开展临床研究和应用的前景。
50.鸭病毒性肿头出血症病毒人工感染鸭的病理学观察
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：72只28日龄樱桃谷鸭肌注感染鸭病毒性肿头出血症病毒(DSHDV),于不同阶段解剖感染鸭和发病死亡鸭,应用光镜和电镜观察各器官的组织组织学和超微结构变化。结果:①光镜:感染前期(2h-72h)各组织充血、出血,并伴有数量不等的炎性细胞浸润；后期(119h-170h)免疫器官(脾脏、胸腺、法氏囊、哈德氏腺)、消化器官(肝、胰)、肾、大脑组织细胞坏死或出现大小不等的坏死灶；消化道(食管、腺胃和各段肠管)和气管粘膜上皮细胞完全坏死脱落,固有膜严重充血、出血；心脏肌纤维间弥漫性出血,肺脏和胸肌组织小血管充血。②电镜:主要表现为细胞核空化,胞浆内各种细胞器肿胀、扩张,甚至溶解、消失,有的形成含有较多病毒粒子的“封入体”。研究表明:法氏囊、胸腺,脾脏、肝脏、消化道和气管为DSHDV感染的主要靶器官。肝细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、胆管上皮细胞、消化道上皮细胞为DSHDV侵害的靶细胞。
51.基因枪免疫小鹅瘟VP3基因疫苗在小鼠体内动态表达
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)以每只6μg、3μg、1μg三个剂量分别用基因枪轰击免疫三组BALB/c小鼠,通过免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在BALB/c小鼠组织中的动态表达规律。结果:免疫后3h即可在三个基因枪免疫组免疫部位的皮肤细胞细胞核中发现pcDNA-GPV-VP3的表达产物,于1d-1wk表达产物最多,表达可以持续到9wk；1wk-4wk内心、肾、肝细胞细胞核中可以检测到pcDNA-GPV-VP3的表达产物；pcDNA-GPV-VP3表达产物的量与免疫剂量之间较弱的正比关系。研究表明:通过基因枪免疫小鼠后,pcDNA-GPV-VP3可在小鼠体内快速地表达；基因枪免疫小鼠的方法具有高效和可靠的优点。
52.荧光定量PCR检测基因枪轰击免疫小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内的动态分布
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：通过基因枪轰击不同剂量(6μg/只、3μg/只和1μg/只)GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)免疫BALB/c小鼠,并用萤光定量PCR(FQ-PCR)检测pcDNA-GPV-VP3在小鼠各组织器官中(心、肝、脾、肺、肾、脑、肠和免疫部位皮肤)分布规律。结果表明:①pcDNA-GPV-VP3在各剂量免疫小鼠1h即可在各组织中被检测到,其中在免疲部位皮肤含量最高,在心与肺中含量也较高,在脑中含量最低；②pcDNA-GPV-VP3在组织器官里的含量于3h开始下降31wk仍能在三个剂量免疫组小鼠的各个组织器官中检测到,但多数组织器官中的含量比1h时约少了102,免疫部位皮肤减少了103；③不同剂量免疫组各组织器官中pcDNA-GPV-VP3含量6μg/只组＞3μg/只组＞1μg/只组,但剂量组之间的差异并不显著。研究表明:FQ-PCR是定量检测pcDNA-GPV-VP3在免疫小鼠各组织器官含量的可靠实验手段,pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠后lh时可分布至小鼠体内各组织器官中并持续存在31wk以上。
53.肌注免疫小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内表达时相的研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)以每只200μg、100μg、50μg三个剂量分别肌肉注射免疫三组BALB/c小鼠,通过免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在BALB/c小鼠体内的动态表达规律。结果:表达产物在心、免疫部位肌肉、肾和肝细胞细胞核中被检测到,基因疫苗的剂量和表达产物的量呈现一定的正相关性。研究表明:pcDNA-GPV-VP3通过肌肉注射免疫小鼠后,可在小鼠体内快速地表达；肌肉注射免疫pcDNA-GPV-VP3的方法具有简便和可靠的优点。
54.肌注和基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内表达时相的比较研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射和6μg、3 μg、1μg基因枪轰击的方法免疫六组BALB/c小鼠,通过免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在BALB/c小鼠体内的动态表达规律。结果:在肌肉注射三组中,表达产物在心、免疫部位肌肉、肾和肝细胞细胞核中被检测到,基因疫苗的剂量和表达产物的量呈现一定的正相关性；基因枪轰击三组中,表达产物在心,免疫部位皮肤、肾和肝细胞细胞核中被检测到,基因疫苗的剂量和表达产物的量呈现较弱的正相关性。研究表明:肌肉注射和基因枪轰击都是pcDNA-GPV-VP3良好的免疫途径,基因枪轰击基因疫苗剂量很小,但基因疫苗在多种组织中较肌肉注射先检测出表达产物且持续时间长,表达量多,基因枪轰击免疫要优于肌肉注射免疫。
55.肌注和基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内的动态分布的比较研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射和6μg、3μg、1μg基因枪轰击的方法免疫六组BALB/c小鼠；以PBS和空载体pcDNA3.1(+)为对照,于免疫后不同时间采取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肠和免疫部位肌肉,应用荧光定量PCR检测pcDNA-GPV-VP3在各组织器官中的分布及含量情况。检测结果表明:pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠后1-3 h后可分布至小鼠体内各组织器官中且含量达到最大,随后含量下降,但仍能持续存在31 wk以上。在肌肉注射pcDNA-GPV-VP3三组中,基因疫苗的剂量和基因疫苗在组织中的含量呈现正相关性,15wk前差异显著,但15 wk后差异不显著；在基因枪轰击pcDNA43PV-VP3三组中,基因疫苗的剂量和基因疫苗在组织中的含量呈现较弱的正相关性,各剂量之间差异不显著。研究表明:不同剂量pcDNA-GPV-VP3肌注和基因枪轰击免疫小鼠后能迅速分布到机/体个各组织器官并达到最大含量,之后含量下降,但较长时间后(31wk)仍能在组织中检测到有一定含量。
56.间接免疫酶染色检测Ⅰ型鸭肝炎病毒
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本文以蔗糖密度梯度离心提纯的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)免疫兔制备兔抗DHV-Ⅰ抗体,建立了间接免疫酶染色(ⅡS)检测石蜡组织切片中的DFIV-Ⅰ抗原的方法,并对DHV-I强毒人工感染死亡或濒死雏鸭的各个组织器官进行检测。结果表明建立的ⅡS与DHV-Ⅰ感染死亡或濒死雏鸭的肝脏等出现阳性反应,与鸭瘟病毒、鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌,多杀性巴氏杆菌感染发病和死亡雏鸭的肝脏以及健康雏鸭的肝脏出现阴性反应。感染DHV-Ⅰ死亡或濒死雏鸭的肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胸腺、法氏囊、胰腺、十二指肠、盲肠,空肠、回肠、直肠免疫组化检测呈阳性或强阳性,DHV-Ⅰ抗原主要分布于感染细胞的细胞质。该法具有良好特异性,可用于DHV-Ⅰ在感染雏鸭组织细胞中的亚细胞定位、DHV-Ⅰ感染雏鸭的实验室诊断、甲醛固定组织的回顾性诊断。
57.鸭肝炎病毒间接免疫荧光检测与定位方法的建立
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本文以蔗糖密度梯度离心提纯的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)免疫兔制备兔抗DHV-Ⅰ抗体,通过对各种反应物的工作浓度与作用时间的优化,建立了DHV的间接免疫荧光检测技术。结果表明建立的IFA与DHV-Ⅰ感染死亡或濒死雏鸭的肝脏等出现阳性反应,与鸭瘟病毒、鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌感染发病和死亡雏鸭的肝脏以及健康雏鸭的肝脏出现阴性反应。感染DHV-Ⅰ死亡或濒死雏鸭的肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胸腺、法氏囊、胰腺、肠道IFA检测呈阳性或强阳性,DHV-Ⅰ抗原主要分布于感染细胞的细胞质。对65个临床病料进行了检测,检测结果与鸡胚分离法进行比对,结果符合率为96.1%。该法具有良好特异性,可用于DHV-Ⅰ在感染雏鸭组织细胞中的亚细胞定位、DHV-Ⅰ感染雏鸭的实验室诊断、甲醛固定组织的回顾性诊断。
58.鸭瘟弱毒疫苗诱导免疫鸭细胞和体液作用的研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：将鸭瘟弱毒疫苗用肌肉注射免疫28日龄鸭,接种后采血用淋巴细胞增殖试验(MTT法)测定鸭外周血T淋巴细胞转化:用流式细胞仪(FACS)测定CD3+T淋巴细胞数量的动态变化；用间接ELISA法检测血清抗体水平。结果表明:免疫组鸭T淋巴细胞对ConA的反应能力于21～28d显著高于空白对照组；外周血CD3+T淋巴细胞数量于21～28d极显著高于空白对照组；血清抗体水平在28d时达到峰值,并于14～182d板显著或显著高于空白对照组。表明,鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭能产生良好的细胞免疫应答和体液免疫应答,为—种有效的生物制剂。
59.基因枪轰击和肌肉注射小鹅瘟病毒VP3基因疫苗诱导小鼠免疫发生的比较研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：将本实验室构建的小鹅瘟VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别按每只6、3、1μg基因枪轰击和200、100、50μg肌肉注射免疫BALB/c小鼠,以pcDNA3.1(+)和生理盐水为对照。并于免疫后3、7、14、21、28、35、49、63、77、105 d采抗凝血用淋巴细胞转化实验(MTT法)和流式细胞仅(FACS)分别检测小鼠外周血T淋巴细胞转化效果和CD4+、CD8+淋巴细胞动态变化,以上10个时间段再加免疫后133、161、189、217d采凝血用酶联免疫实验(间接ELISA法)检测小鼠特异性IgG抗体。结果表明:基因枪轰击较肌注pcDNA-GPV-VP3基因疫苗诱导体液免疫应答的能力更强,而二者在诱导T淋巴细胞增殖和CD4+、CD8+T淋巴细胞介导的细胞免疫应答方面效果相当。
60.小鹅瘟病毒VP3基因疫苗与弱毒疫苗诱导小鼠免疫应答的比较
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：将本实验室构建的小鹅瘟VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别按每只6 μg基因枪轰击和100μg肌肉注射免疫BALB/c小鼠,小鹅瘟弱毒疫苗按每只100μL免疫BALB/c小鼠,以peDNA3.1(+)和生理盐水为对照。并于免疫后3、7、14、21、28、35、49、63、77、105 d采抗凝血用淋巴细胞转化实验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)分别检测小鼠外周血T淋巴细胞转化效果和CD4+,CD8+T淋巴细胞动态变化,以上10个时间段再加免疫后133、161、189、217d采凝血用酶联免疫实验(间接ELISA法)检测小鼠特异性IgG抗体。结果表明:基因枪轰击6 μg组、肌肉注射100μg组和弱毒疫苗组都能诱导小鼠产生细胞免疫和体液免疫应答；且基因疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫和体液免疫应答比弱毒组强。
61.基因枪轰击和肌注不同剂量小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在雏鹅体内的表达的时相的比较研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本文将GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射,6μg、3μg、1μg基因枪轰击的方法免疫30日龄四川白鹅,以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,于免疫接种后1h、12h、1d、3d、7d、21d、35d、63d、105d和217d采集全血以及各组织器官,用免疫组织化学方法检测pcDNA-GPV-VP3在雏鹅体内表达的时相分布。结果表明:①pcDNA-GPV-VP3的表达产物1d时能在免疫部位中的细胞质中检测到,且量最大；②肠腺和肠绒毛上的杯状细胞细胞质,心肌细胞核3d后也能检测到较多阳性,7d数量最多；③肝细胞间质中有零星表达；④肺、肾、脾、胰腺、脑、法氏囊、胸腺中未见表达；⑤不同剂量pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后表达产物在各组织器官中量呈现的总体规律为6μg组＞3μg组＞1μg组。因此,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后能在能在心肌细胞核,肝细胞核、肠腺和肠绒毛的杯状细胞质、免疫部位皮肤细胞质和细胞间内成功进行表达。
62.基因枪轰击和肌注小鹅瘟VP3基因疫苗在鹅体内的动态分布规律
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本文将GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射,6μg、3μg、1μg基因枪轰击的方法免疫30日龄四川白鹅,以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,于免疫接种后1h、12h、1d、3d、7d、21d、35d、63d、105d和217d采集全血以及各组织器官,用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测pcDNA-GPV-VP3在雏鹅体内的动态分布。结果表明:①各剂量免疫雏鹅1h即可在各组织中被检测到,其中免疫部位含量最高,其次是肝、肾、淋巴器官(脾、法氏囊、胸腺、哈氏腺)；②到217d时,各组雏鹅各个组织器官内仍检测到pcDNA-GPV-VP3的存在,但多数组织器官中的含量比1h时约低了少了103-104,其中免疫部位减少了约104-105；③血液中pcDNA-GPV-VP3的含量较少,1h比其他组织低101-102；④含量达到最大后开始下降,随着时间的推移,pcDNA-GPV-VP3在各组织器官中含量的下降速度有变慢的趋势,3d-21d约下降了100.1-100.5,到63d-217d含量仅下降了100.5-101；⑤脑1h-12h含量呈上升趋势,12h时达到最大值,随后下降；⑥不同剂量pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅各组织中的含量呈现的总体规律为200μg组＞100μg组＞50μg组,6μg组＞3μg组＞1μg组,,但差异不显著。因此,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后1h时可分布至雏鹅体内各组织器官中并持续存在217d以上。
63.口服鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中IgA、IgM和IgG发生规律研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：为探讨鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中抗体发生的规律,本研究将鸭瘟病毒Cha株弱毒苗口服免疫20日龄樱桃谷鸭后60天内定时随机剖杀5只鸭,采集血清、胆汁、气管和消化道(食道、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠)分泌液,应用间接ELISA检测抗DPV的IgA,IgM和IgG滴度(以Log10表示)。结果表明:①血清:检测到IgA、IgM和IgG的时间段分别为9-36、3-15和9-60天,滴度由高到低为IgG、IgM和lgA。②胆汁:检测到IgA、IgM和IgG的时间段分别为6-15、9-12和12-36天,滴度由高到低为IgA、IgG和IgM。③气管:检测到IgA、IgM和IgG的时间段分别为6-60、3-12和9-27天,滴度由高到低为IgA、IgM和IgG。④食道:检测到IgA、IgM和IgG的时间段分别为3-60、3-27和9-60天,滴度由高到低为IgA、IgM和IgG.⑤各肠道中抗体滴度由高到低及相应检测到的时间段为:十二指肠中为IgA(3-60天)、IgM(3-15天)和IgG(9-27天)；空肠中为IgA(6-60天)、IgM(6-12天)和lgG(9-36天)；回肠中为IgA(9-60天)、IgM(6-9天)和IgG(15-21天)；盲肠中为IgA(6-60天)、IgG(12-36天)和IgM(6天)；直肠中为IgA(3-60天)、IgG(12-21天)和IgM(6天)。综上,鸭瘟弱毒疫苗口服免疫鸭后,IgM和IgG分别是系统免疫中体液免疫的先锋抗体和主要抗体；IgA、lgG和IgM在胆汁中存留时间短；IgA是气管和消化道中的主要抗体。
64.鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中IgA、IgM和IgG发生规律研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：为探讨鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中抗体发生的规律,本文将鸭瘟病毒Cha株弱毒苗经皮下、口服和滴鼻途径免疫20日龄樱桃谷鸭后60天内定时随机剖杀5只鸭,采集血清、胆汁、气管和消化道(食道、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠)分泌液,应用间接ELISA检测抗DPV的IgA、IgM和IgG抗体滴度(以Loglo表示)。结果表明,所有免疫鸭受检样品中均可检测到DPV特异性IgG、IgM和IgA抗体,其中:①血清:抗体滴度由高到低均为IgG、IgM和IgA,其中IgM检出时间最早,IgG存留时间最长。三种途径免疫鸭中,皮下免疫鸭IgG检出时间最早,滴度最高；口服和滴鼻鸭IgA检出时间最早,滴度最高。②胆汁:三种抗体在胆汁中存留时间均较短,抗体滴度由高到低为IgA、IgG和IgM.免疫鸭胆汁中IgA检出时间最早,均于免疫后第12天达到滴度高峰后,迅速降低并于第21～27天消失。③分泌液:气管和消化道分泌液中抗体滴度由高到低均为IgA、IgM和IgG,其中IgA最早于免疫后第3-9天检测到,于第21-27天达到高峰,至第60天时依然可检测到,十二指肠中IgA抗体滴度是气管和消化道分泌液中最高的；IgM最早于免疫后第3～9天检出,于第6～9天达到滴度高峰后陆续消失；IgG检出时间最晚.气管中IgA滴度以滴鼻鸭为最高,口服鸭次之；消化道中lgA滴度以口服鸭最高,滴鼻鸭次之。综上,鸭瘟弱毒疫苗经不同途径免疫鸭后,IgM和IgG分别是系统免疫中体液免疫的先锋抗体和主要抗体；IgA是气管、消化道和胆汁中的主要抗体。皮下免疫是诱导鸭系统免疫中体液免疫的最佳途径,而口服和滴鼻途径能够更有效的诱导鸭体液免疫介导的局部黏膜免疫。
65.鸭瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的研制及初步应用
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：DPV经过鸭胚成纤维细胞增殖、反复冻融、差速离心、蔗糖密度介质离心制备纯化抗原,建立了用于检测鸭血清中抗DPV特异性IgG抗体的间接ELISA方法,并对该法进行了标准化研究,确定了最佳工作条件。在此基础上研制了相应的检测试剂盒并对盒内各组分的保存条件、质量控制以及试剂盒的特异性、重复性等方面进行研究。结果表明:4.751μg/孔的纯化DPV抗原包被反应板可获得良好特异性和敏感性,1:100稀释的待检血清样品反应后OD405值换算为抗体滴度的标准直线方程为：y=1.573+3.552x(r2=0.9528,n=20)。试剂盒在4°C保存3个月或-20°C保存10个月后各项性能都很好。应用该试剂盒对皮下注射、口服和滴鼻免疫DPV弱毒的20日龄樱桃谷鸭血液中抗DPV特异性IgG抗体滴度进行测定,结果表明:皮下免疫鸭于第6d、口服和滴鼻免疫鸭于第9d可在血清中检测到DPV特异性抗体并于第36d达到滴度高峰,且至60d时依然可检测到高滴度抗体。该试剂盒可用于血清流行病学调查和鸭场DP免疫抗体水平的监测。
66.鸭肿头出血症病毒在鸭胚原代成纤维细胞增殖特性的研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：为了获得适宜鸭肿头出血症病毒(DSHDV)体外培养的细胞,开展了DSFIDV强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)适应性和增殖特性的研究。实验表明,DSHDV强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚传3代,取第3代尿囊液接种DEF,第1代培养至120h DEF出现变圆,脱落,出现了少量蚀斑；第2代培养至96～120 h DEF形成大量圆形或椭圆形的典型蚀斑,第3代培养至72～96h DEF形成了典型蚀斑；此后传代可稳定适应于DEF,典型细胞病变出现于72～96h。DSFIDV在DEF上的TCID50/1mL值随着传代次数增加而增高,由第一代的102.75增加到第10代的106.82,最高毒价出现于96h,该点是收获病毒的最佳时间。将适应DEF的DSHDV感染DEF细胞后制成超薄切片电镜观察,病毒粒子呈球形或椭圆形,大小为60-75nm,无囊膜,具有双层衣壳；感染细胞结构空泡化、内质网和线粒体肿胀、胞核变形且染色质异常聚集。
67.鸭肿头出血症病毒强毒致鸭胚原代成纤维细胞凋亡的研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：通过光镜、电镜、DNA Ladder法、流式细胞术、荧光染色对鸭肿头出血症病毒(DSHDV)诱导鸭胚原代成纤维细胞(DEF)凋亡情况进行检测。结果显示,光镜可见细胞形态学上出现细胞皱缩,染色质浓染边移；电镜观察到细胞胞浆浓缩,细胞核染色质凝聚、部分形成凋亡小体；荧光染色结果显示,在感染后24h有激发绿色荧光的凋亡细胞出现,随着时间的推移,激发红色荧光的死亡细胞数量增多；DNA Ladder检测到感染后24h～144h的DNA样品呈梯形条带；流式细胞术于感染后24h检测到凋亡细胞,其数量在72h～96h达到高峰,144h开始下降。研究结果表明,DSHDV在DEF增殖的过程中具有诱导宿主细胞凋亡的作用。
68.鸭瘟病毒dUTPase基因发现、分子特性及转录分析
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本文应用大量生物信息学分析工具以及RNA斑点杂交技术对本实验室在构建鸭瘟病毒(DPV)CHv株基因文库时新发现的dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)进行了分子特性及转录时相分析。研究表明:该基因大小为1344bp,编码477 aa,包含dUTPase家族蛋白的5个保守motifs,排列形式3-1-2-4-5具备Ⅱ型dUTPase的典型特征。DPV CHv dUTPase基因在25个疱疹病毒参考株之间高度保守,并与α疱疹病毒的氨基酸同源性较之与β、γ疱疹病毒要高。DPV CHv dUTPase基因转录检测发现DEV感染宿主细胞后30min最早可检测到该基因转录产物,随后转录产物量迅速放大,4小时达高峰,24小时后下降至相对低的水平。该研究对阐明病毒基因表达调控机理提供了有用的实验数据,并对病毒其他基因的发现和研究具有指导性意义。
69.鸭瘟病毒dUTPase基因克隆、原核表达及在病毒感染宿主亚细胞中的定位分析
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：根据本实验室新发现的鸭瘟病毒(DPV)dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)序列设计一对引物,PCR扩增产物亚克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU后将其转化至E.coli BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白大小约为66.8ku,与预期表达蛋白大小一致。薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的36.2%,主要以包涵体的形式存在。重组蛋白纯化后制备兔抗血清间接ELISA效价为1:409600。通过免疫荧光技术进行DPV dUTPase亚细胞定位检测,结果显示特异性荧光可最早在感染后4h的胞质中检测到,12h大量点状绿色荧光聚集于胞核；24h后胞核内点状荧光减弱而胞质点状荧光增强；48h胞核和胞质荧光均显著减弱。以上结果为DPV dUTPase基因功能和DPV致病机理的研究提供了重要数据。
70.间接免疫荧光检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒及抗原定位方法的初步建立
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：建立间接免疫荧光(IFA)检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒(DSHDV)的方法,为DSHDV感染的实验室诊断、DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位和动态研究提供有效的检测手段。用差速离心纯化DSHDV,将纯化DSHDV免疫家兔制备兔抗DSHDV高免血清,并以DEAE-SephadexA-50柱层析纯化出兔抗DSHDV IgG,建立IFA检测石蜡切片中DSHDV的方法；利用建立的IFA对28日龄鸭人工感染DSHDV死亡鸭不同组织器官以及临床样品进行检测。应用PAGE电泳分析DSHDV基因组特性。IFA最佳条件为:切片在0.01mol·L-1柠檬酸(pH6.0)缓冲液微波修复20min后,以10%马血清37°C下封闭30min,然后加入1:50的一抗4°C孵育过夜,最后加入1:100 FITC标记的含0.01%伊文斯蓝的二抗37°C孵育30min.IFA检测DSHDV感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阳性,而检测鸭瘟、禽流感病毒(H5N1)、鸭病毒性肝炎、鸭疫里默氏杆菌感染死亡鸭肝脏石蜡切片为阴性。IFA检测28日龄人工感染DSHDV死亡鸭的不同组织器官,心、肝、脾、胰、肺、肾、法氏囊、食管、气管、胸肌、胸腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠为阳性;哈德氏腺、脑,皮肤、腺胃为阴性。阳性组织中病毒抗原主要分布在细胞浆.经甲醛固定保持1～6年的临床死亡鸭的病毒分离阳性肝脏,IFA检测结果也呈阳性。DSHDV具有呼肠孤病毒特征,有10条分节段核酸,呈“334”分布。建立的检测石蜡组织切片中DSHDV抗原的IFA具有直观、特异性强的优点,应用于DSHDV在感染鸭组织细胞中的亚细胞定位具有良好效果,可用于DSHDV感染的实验室诊断、病原在鸭组织细胞中分布研究。DSHDV抗原存在感染细胞浆,肠道、肾脏、法氏囊和胸腺是DSHDV侵害的主要靶器官。
71.EIAV标记感染性克隆分子的构建
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本研究应用已构建好的EIAV驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆裁体(pOK8266)为模板,通过SOE PCR方法在感染性分子克隆载体的S2基因独特区内引入突变点,形成含有酶切位点(NspV)的突变体(P1P4)。将突变体(P1P4)亚克隆至pBlueseript SK(M13-)质粒,形成pB-P1P4中间载体；人工合成两条六个组氨酸的引物,作为标签,将其插入pB-P1P4中间载体的NspV位点,形成带标签的中间载体；用ApaI酶切poK8266和中间载体,连接转化,构建带标签的重组感染性分子病毒克隆载体(EIAV-p8.2-HIS),经PCR、酶切和测序表明,六个组氨酸已插入pOK8266的s2基因内。分别转染驴皮肤细胞(FDD)和驴白细胞,将转染驴皮肤细胞收获物传至第六代,电镜下未观察到EIAV病毒；而将转染驴白细胞收获物传代至第六代时,电镜下观察到了典型的病毒粒子。提取前病毒DNA,PCR扩增P1P4片段,亚克隆至pMD18-T载体,测序证明前病毒DNA含有六个组氨酸,从而在体外获得了感染性克隆病毒株。本研究通过SOE法巧妙地对S2基因引入突变,插入HIS标签,成功地获得了标记感染性分子克隆,证明S2基因缺失突变株在体外巨嗜细胞上培养不影响其复制力,为野毒株和疫苗毒的鉴别诊断打下基础。
72.斑点叉尾鮰生长激素基因的克隆、进化分析
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：以提取的斑点叉尾鲴脑垂体总RNA为模板,用Oligo(dT)作为引物逆转录(RT)出cDNA后以生长激素的特异引物进行PCR扩增,成功扩增出其生长激素基因。将此基因克隆于pMD18-T vector并经质粒PCR和Xho Ⅰ/EcoR Ⅰ双酶切鉴定后命名为pMD18-GH.测序结果显示pMD18-GH中含有完整的斑点叉尾鮰生长激素基因开放阅读框,其大小为603bp,编码200个氨基酸残基。推导的生长激素前体由21个氨基酸的信号肽和179个氨基酸的成熟肽组成。同源性分析表明斑点叉尾鮰与哺乳动物、鸟类、爬行类、两栖类的生长激素基因同源性差异较大,与鱼类较近。以生长激素基因的ORF序列构建的系统进化树表明斑点叉尾鲴与鲇形目的亲缘关系最近。
73.五种鲤科鱼类生长激素完整cDNA的克隆和序列分析
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：通过RT-PCR方法,以5种鲤科重要经济鱼类。草鱼、鳙鱼、鲫鱼、鲤鱼、齐口裂腹鱼的垂体总RNA为模板扩增出其生长激素(fGH)的完整ORF序列并克隆到pMD18-T载体上并命名为pMD-1(草鱼)、pMD-2(鳙鱼)、pMD-3(鲫鱼)、pMD-4(鲤鱼),pMD-5(齐口裂腹鱼)。测序结果显示其长度均为633bp。序列分析表明,所有ORF序列均以ATG为起始密码,以TAG为终止密码,编码210个氨基酸残基,推导的生长激素前体由22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟肽组成。同源性分析表明草鱼、鳙鱼、鲤鱼、鲫鱼和齐口裂腹鱼的fGH同源性在93.3%-99.5%之间。齐口裂腹鱼的fGH完整cDNA克隆在国内外尚未见报道。
74.齐口裂腹鱼生长激素成熟肽基因的克隆和原核表达研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：运用RT-PCR技术,首次从齐口裂腹鱼(Schizthorax prenanti)脑垂体扩增出生长激素(GH)完整开放阅读框(ORF),共633 bp,编码210 aa。分子进化分析表明其与草鱼和鲤鱼GH的进化关系较近,而与人类的GH基因进化距离较远。运用PCR技术从含齐口裂腹鱼GH开放阅读框序列质粒中扩增其成熟蛋白编码基因,共564 bp。将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)后在E.coli BL21中诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白约为41kD,重组蛋白以包涵体形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的42.6%.齐口裂腹鱼GH成熟肽成功在体外获得高效表达,为齐口裂腹鱼的保护积累了一定理论依据。
75.斑点叉尾鮰α-干扰素基因的克隆和原核表达
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：根据GenBank中发表的斑点又尾鲴干扰素基因序列设计一对引物,采用RT-PCR在斑点叉尾鮰淋巴细胞中克隆出了α-干扰素基因。序列分析显示与已发表的序列同源性在96.5%以上。同时将基因连接到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组表达质粒,转入BL21经0.2mmol/L的IPTG诱导4小时后经SDS-PAGE分析,可见一约19KD的清晰蛋白带,用Bandscan软件分析蛋白表达量为48.4%表明该基因得到了高效表达。
76.高密度发酵大量制备鸭α-干扰素基因疫苗中试生产关键技术研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：对pcDNA-SDIFN-α的重组大肠杆菌进行发酵培养条件(温度、pH、溶氧浓度、补料速度、接种量、发酵时间和消泡剂添加量溅化,筛选出了适合DH5α菌株生长的最佳发酵条件为:温度37°C,pH7.4,溶氧含量40%,接种量4%,补料速度80ml/h,发酵时间18h,消泡剂添加量0.02%,此条件下,pcDNA-SDIFN-α质粒含量可达到357mg/L。
77.鸭α-干扰素基因疫苗高密度发酵及免疫鸭抗鸭瘟强毒人工感染的研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：本文对鸭α-干扰素基因真核表达质粒(pcDNA-SDIFN-α)的重组大肠杆菌大规模中试生产发酵培养条件、pcDNA-SDIFN-α免疫鸭抗0.5 LD50鸭瘟强毒感染进行系统研究,获如下结果:1.pcDNA-SDIFN-α大规模中试生产发酵培养条件:对pcDNA-SDIFN-α的重组大肠杆菌进行发酵培养条件(温度、pH、溶氧浓度、补料速度、接种量、发酵时间和消泡剂添加量)优化,筛选出了适合DH5α菌株生长的最佳发酵条件为:温度37°C,pH7.4,溶氧含量40%,接种量4%,补料速度80ml/h,发酵时间18h,消泡剂添加量0.02%,此条件下,pcDNA-SDIFN-α质粒含量可达到357mg/L。2.pcDNA-SDIFN-α疫鸭抗0.5LD50鸭瘟强毒感染:将pcDNA-SDIFN-α分别按每1μg、3μg和6μg三个剂量基因枪轰击免疫北京鸭,以PBS、空载体质粒pcDNA 3.1(+)和鸭瘟弱毒疫苗为对照,免疫15 d后分经皮下注射人工感染0.5LD50鸭瘟强毒(含病毒DNA拷贝数为3.524x104),统计发病死亡情况,并于攻毒后2 h、6 h、12 h、24 h、3d、6d、9d、14d,22d,26d、33d和40d采全血,采用实时荧光定量PCR对鸭瘟病毒在鸭外周血中含量的动态变化进行检测。结果:pcDNA.SDIFN-α基因枪免疫组鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量比PBS和空载体对照组低,差异显著,在3d前都低于弱毒疫苗免疫组,差异不显著。三个剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组之间外周血鸭瘟病毒DNA含量差异不显著,攻毒初期(2h),6μg免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量最低,3μg次之,1μg最高.基因枪1 μg免疫皮下攻毒组有3/9只鸭死亡,滴鼻攻毒组有3/9只鸭死亡；基因枪3 μg免疫滴鼻攻毒组有3/9只鸭死亡；PBS和空载体免疫组分别有13/27和10/27只死亡,基因枪6μg免疫鸭以及鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭获得100%保护。病死鸭的脾脏、十二指肠、空肠、盲肠和直肠是鸭瘟病毒DNA含量较高的组织器官。研究表明,基因枪轰击和肌肉注射pcDNA-SDIFN-α免疫鸭后能产生一定的抗鸭瘟强毒感染的作用,并表现出一定的量效关系。
78.鸭α-干扰素基因疫苗在免疫鸭体内动态分布规律的定量检测研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：为弄清本实验室构建的鸭α-干扰素基因疫苗(pcDNA-SDIFN-α)在免疫鸭体内动态分布规律及其存留时间,为pcDNA-SDIFN-α的临床应用研究提供基础数据,本文将50、100和200μgpcDNA-SDIFN-α分别肌肉注射28日龄樱桃谷肉鸭,设PBS和空载体质粒pcDNA3.1(+)对照,建立并应用TaqMan探针实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测不同时间点pcDNA-SDIFN-α在血液以及各组织器官(心脏、肝脏、脾脏、肺脏,肾脏、脑、胸腺、哈氏腺、法氏囊、胰脏、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠和肌肉接种部位的组织)含量。结果表明:①建立的FQ-PCR具有特异性强、灵敏度高、快速等特点,pcDNA-SDIFN-a初始核酸模板浓度与Ct值之间相关系数为0.999,呈较好的线性关系；②各剂量pcDNA-SDIFN-α免疫鸭1h即可在血液及各组织中均检测到,注射部位含量最高,显著高于除心脏外的其它样品；③在除血液外各组织器官中pcDNA-SDIFN-α的含量在1d时均已达到最高,随后逐渐减少,免疫后1d-3d期间减少速度最快；④105d时各组织器官中均能检测到,但含量已仅有102拷贝数左右,其中注射部位减少最明显(达6个数量级)； ⑤血液中pcDNA-SDIFN-α含量一直较低,变化差异不显著；⑥不同剂量免疫组各组织器官中pcDNA-SDIFN-α的含量的总体规律为200μg组＞100μg组>50μg组,但差异不显著。因此pcDNA-SDIFN-α肌肉注射能迅速分布到鸭体各组织器官中并持续存在105d以上。
79.重组鸭α-干扰素基因工程菌表达条件的研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：为了确定重组鸭α-干扰素(DulFN-α)基因工程菌BL21(DE3)/pET32a+-DuIFN-α的最佳表达条件,对影响原核表达的主要因素:IPTG浓度、诱导时期、收获时间、培养诱导温度、葡萄糖浓度及培养基进行了优化；并利用抗性筛选对表达质粒的稳定性进行了研究。结果显示,诱导基因工程菌BL21(DE3)/pET32a+-DulFN-α表达DulFN-α的最佳条件为:以TB+5g/L葡萄糖培养基37°C培养至菌体OD600=0.8～1.1时,加入IPTG至终浓度0.2mmol/L,30°C诱导培养4～5h。在最佳表达条件下,DuIFN-α的相对含量为34.1%,总含量(终菌体浓度×相对含量)达79.9；各种优化条件对表达质粒的稳定性未见明显影响。
80.鸭IFN-α成熟蛋白基因原核表达、产物纯化和复性关键技术及其抗病毒活性
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：为获得并研究鸭干扰素-α(DuIFN-α)的生物学功能,将鸭干扰素-α(DuIFN-α)成熟蛋白基因与原核表达载体pET32a+连接后转化到BL21(DE3)获得工程菌BL21(DE3)/pET32a+-DuIFN-α,对其诱导表达条件、表达产物的纯化和复性关键技术及其抗水疱性口炎病毒(VSV)活性、保存温度对工程菌稳定性的影响进行了研究。结果表明:BL21(DE3)/pET32a+-DuIFN-α经0.4mmol/L IPTG诱导获得高效表达,表达的重组蛋白分子量大小约37KD,以包涵体形式存在；重组蛋白经镍金属螯合介质(Ni-MIAC)进行纯化和复性后获得理想效果,其抗VSV活性的比活力达到12800U/mg;15U/ml的鸭干扰素-α鸭瘟强毒可以表现出抑制作用；工程菌种的表达能力在4°C和-20°C分别保存40d和90d即逐渐丧失,-70°C保存1年仍能够获得稳定表达。本复性方法成功的实现了鸭干扰素-α的柱上层析复性,表现出了对VSV和DPV强毒的抗病毒活性,为鸭干扰素-α的临床应用提供了试验数据。
81.鸭IFN-α成熟片段基因的原核表达及抗细胞培养中鸭瘟强毒研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因并克隆到PMD18-T载体,测序鉴定后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达。表达的重组蛋白分子量大小约37KD,以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30%。利用镍金属螯合介质填料对表达产物进行纯化,经过复性后加入长成单层的鸭胚成纤维细胞(DEF)作用18h,接种100PFU鸭瘟病毒(DPV)强毒后,利用实时定量PCR检测1h、4h、9h、15h、23h、31h、39h、47h、55h、63h DPV的数量变化。结果:在DPV感染后15 h内,重组鸭IFN-α抗DPV组的病毒核酸拷贝数与不加鸭IFN-α的阳性对照组之间差异不显著；从23h开始鸭IFN-α保护组的核酸拷贝数低于阳性对照组并在感染后47h-55h其拷贝数差异达到最大,差异显著；与阳性对照组的DPV拷贝数相比,鸭IFN-α保护组在55h时能减少病毒108.83个核酸拷贝数,相对抑制率为80%.表明重组鸭IFN-α能明显抑制对数期的DPV复制,具有进一步临床应用的潜力。
82.肌注和基因枪轰击鸭α-干扰素真核表达质粒对DVH弱毒苗免疫鸭的细胞和体液免疫调节作用的比较研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：鸭α干扰素真核表达质粒(pcDNA-DuIFN-α)以不同途径(基因枪轰击和肌注)免疫28日龄北京鸭,15天后接种DVH弱毒疫苗,同时设空载体+DVH弱毒疫苗、生理盐水,DVH弱毒疫苗以及pcDNA-DuIFN-α免疫鸭对照组,10只鸭/组,于DVH弱毒疫苗免疫后5,7、14、21、28、42、56、70d采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)和鸡胚中和实验分别对免疫鸭外周血的CD3+淋巴细胞总数、T淋巴细胞转化能力和外周血中和抗体的效价进行动态检测。结果:①CD3+淋巴细胞数量:6个实验组7-56 d极显著高于生理盐水对照鸭,显著高于(P≤0.05)空载体+DVH弱毒疫苗、DVH弱毒疫苗及其pcDNA-DuIFN-α组；6个实验组间差异不显著,100μg组于14-28 d略高于其他试验组。②T淋巴细胞对ConA的反应能力(OD值):6个实验组5-70 d极显著高于生理盐水对照鸭,21-56 d显著高于空载体+DVH弱毒疫苗、DVH弱毒疫苗及其pcDNA-DulFN-α组；6个实验组间无显著差异。③中和抗体效价:7-70d时6个实验组问差异不显著,显著高于DHV和空载体+DHV组。研究表明基因枪轰击pcDNA-DuIFN-α可以显著增强DVH弱毒疫苗免疫鸭的细胞免疫水平,且优于肌注。
83.重组鸭α-干扰素抗鸭乙型肝炎病毒人工感染鸭的实验研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：观察重组鸭α-干扰素体内抗鸭乙型肝炎病毒的作用。采用DHBV阳性血清感染1日龄的北京鸭作为乙型肝炎动物模型,将重组鸭α-干扰素按500 U、1000 U、2000 U三个剂量分别对感染鸭进行肌注治疗15d,同时设立拉米夫定对照组和生理盐水对照组,用荧光定量PCR检测治疗前后和停药后鸭血清、肝、胰、肾、脾、肺、心、脑、十二指肠等组织中DHBV DNA含量的变化。结果显示:拉米夫定对照组于用药后,血清DHBV DNA含量迅速下降,但停药后存在反弹现象；鸭α-干扰素各剂量组用药后血清中DHBV DNA含量均下降,2000U和1000U组分别于用药第5d、10d其血清病毒含量显著下降,500U组各时间点与用药前水平差异均不显著,停药后1000U组有持续抑制DHBV的作用,而2000U和500U组均反弹。同时鸭α-干扰素降低了组织中DHBV DNA含量,但抑制效果在不同组织存在差异。鸭α-干扰素具有抑制体内DHBV复制的作用,其作用大小与剂量及用药时间相关；鸭α-干扰素抑制作用略弱于拉米夫定,但停药后,鸭α-干扰素1000U组具有持续效应。
84.不同剂量鸭IFN-α真核表达质粒基因枪免疫对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭细胞和体液免疫调节作用研究
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：为探索鸭α干扰素(IFN-α)真核表达质粒(peDNA-SDIFN-α)对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭的免疫调节作用,本研究将pcDNA-SDIFN-α以1、3和6μg/只3个剂量用基因枪轰击法分别免疫28日龄鸭,以PBS和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,所有鸭15d后接种鸭瘟(DP)弱毒疫苗,接种后第3、7、14、21、28、35,49、63,84 d采血用淋巴细胞增殖试验(MTT法)测定鸭外周血中T淋巴细胞转化效果和第7、14、21、28、35、49 d采血用流式细胞仪(FACS)测定CD3+T淋巴细胞数量的动态变化。第7、14、21、28、35,49、63、84、105、126、154、182 d采血用间接EL,ISA法检测血清抗体水平。结果发现:不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭外周血T淋巴细胞转化功能均极显著或显著高于弱毒和空载体对照组。不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭CD3+T淋巴细胞数量均显著或极显著高于弱毒和空载体对照组。在第7 d时,所有组鸭血清抗体水平都迅速升高,在28 d时达到高峰,其高抗体水平维持一段时间后缓缓下降。不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭血清抗体IgG于7～154 d高于弱毒对照组和空载体对照组,有显著差异。在诱导细胞免疫和体液免疫方面,弱毒和空载体对照组间无显著差异。研究表明,pcDNA-SDIFN-α提前15 d免疫能显著增强DP弱毒疫苗诱导的鸭细胞免疫和体液免疫能力,以基因枪免疫1μg/只的效果最佳,是一种良好的增强DP弱毒疫苗细胞免疫的分子佐剂。
85.不同剂量鸭IFN-α真核表达质粒对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭细胞和体液免疫调节作用初探
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：为探索鸭α干扰素(IFN-α)真核表达质粒(pcDNA-SDIFN-α)对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭的免疫调节作用,本文将pcDNA-SDIFN-α以每只50、100和200μg三个剂量用肌肉注射法分别免疫28日龄鸭,以PBS和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,所有鸭15 d后接种鸭瘟(DP)弱毒疫苗,接种后第3、7、14、21、28、35、49、63、84、105 d采血用淋巴细胞增殖试验(MTT法)测定鸭外周血T淋巴细胞转化;第7、14、21,28、35、49 d采血用流式细胞仪(FACs)测定CD3+T淋巴细胞数量的动态变化:第7、14、21、28、35、49、63、84、105、126、154、182 d采血用间接ELISA法检测血清抗体水平。结果表明:不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭T淋巴细胞对ConA的反应能力于3～49 d均显著或极显著高于弱毒和空载体对照组；鸭外周血CD3+T淋巴细胞数量于7～28d均极显著或显著高于弱毒和空载体对照组.第7 d时,不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭血清抗体水平就极速升高,在28 d时达到高峰；200μg免疫组于14-84 d极显著或显著高于弱毒和空载体对照组,其余组间无显著差异。在诱导细胞免疫和体液免疫方面,弱毒和空载体对照组间无显著差异。研究表明,pcDNA-SDIFN-α提前15d免疫能显著增强DP弱毒疫苗诱导的鸭细胞免疫和体液免疫力,是一种良好的增强DP弱毒疫苗细胞免疫和体液免疫的分子佐剂,用肌肉注射pcDNA-SDIFN-α以每只200μg的效果最佳。
86.鸡IL-18基因变构体毕赤酵母表达载体的构建及分泌表达
- 《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛》 | 2008年
摘要：白介素-18(IL-18)是近年发现的一种重要的细胞因子,具诱生IFN-γ、促进T细胞增殖分化、增强GM-CSF和IL-2的产生及NK细胞、CTL细胞的活性等生物学功能。因此,IL-18在增强免疫、抗微生物感染、抗肿瘤等方面有着广阔的应用前景。近年来,IL-18的研究主要集中于人和鼠方面,而对鸡IL-18的研究则起步较晚,直到Schneider K首次获得ChIL-18 cDNA,此后潘蔚绮等、刘胜旺等和温纳相等分别得到了不同品种鸡的ChIL-18成熟蛋白基因。但目前ChIL-18的克隆表述研究仅在原核表达系统中有一定的进展,在毕赤酵母表达系统中的表达目前国内外尚未见有关报道。本研究通过对MChIL-18成熟蛋白基因进行定点突变,把毕赤酵母的低频密码子突变为同义偏嗜性密码子,并构建分泌型重组表达载体pPICZαA-MChIl18,使MChIL-18整合到酵母染色体中,实现了鸡MChIL-18成熟蛋白基因在毕赤酵母中的高效表达,为进一步研究ChIL-18的生物学特性奠定良好的基础。