慢病毒介导的降钙素基因相关肽转染对大鼠骨髓间充质干细胞内皮分化的影响

摘要

目的:研究慢病毒介导的降钙素基因相关肽(caleitonin gene-related peptide,CGRP)基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)内皮分化功能的影响.方法:用密度梯度离心结合贴壁法培养大鼠骨髓MSCs,携带CGRP的慢病毒载体转染MSCs,未转染MSCs作为对照,应用ELISA法检测CGRP蛋白表达;实验分为转染Lenti-CGRP的MSCs (CGRP)组、转染Lenti-CGRP的MSCs+ CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37)组(CGRP+CGRP8-37)及未经转染的对照组.应用免疫细胞化学检测细胞CD31和Ⅷ因子相关抗原的表达以鉴定其分化能力;细胞计数法观察转染CGRP后MSCs增殖的影响;Matrigel实验观察转染CGRP对MSCs形成管腔样结构能力的影响.结果:MSCs转染CGRP基因经诱导分化后的CD31和Ⅷ因子相关抗原阳性细胞数量增多,与对照组相比有显著差异(P ＜0.05);转染CGRP组细胞数量增长较快,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);Matrigel实验显示转染CGRP组细胞微血管新生明显,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).而CGRP+ CGRP8-37组上述作用明显被抑制.结论:转染CGRP基因能促进MSCs向内皮分化,并能促进内皮细胞增殖,在一定的条件下,可促进微血管新生.