人类间隙连接蛋白CX58基因的克隆

摘要

目的利用同源性分析,克隆定位新的人类间隙连接蛋白基因,并探讨该基因和遗传性耳聋的关系.方法将小鼠Cx57基因的编码区与美国国家生物信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)的表达序列标签数据库(database of expressed sequence tags, dbEST）进行BLAST（basic local alignment search tool）分析，在得到的代表人类新基因的EST序列构建重叠群上设计引物CX58F1/CX58F2和CX58R1/CX48R2分别与cDNA文库及Ready cDNA载体臂上引物行巢式聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）,末端快速扩增（rapid amplification of cDNAends,RACE）,获得cDNA后与大规模测序结果经较，定位该基因，并在常染色体显性遗传性耳聋家系中进行突变分析。结果将利用同源性分析得到的9个人类新的EST，构建重叠群设计引物行巢式PCR、RACE，在肝、肾的Ready cDNA文库中得到1个全长cDNA并命名为CX58。通过与大规模测序结果比较，将该基因定位于1p32.3-p34.1。12个常染色体显性遗传性耳龙家系中未检测到突变。结论通过同源性分析，我们克隆定位了1个新的人类间隙连接蛋白基因CX58。该基因突变可能不是引起常染色体显性遗传性耳聋的常见原因或与该病无关。