应用巢式PCR对单细胞进行性别诊断的初步研究

摘要

目的应用巢式PCR技术对人类植入前胚胎进行性别诊断.方法收集单个或两个淋巴细胞和卵裂球(50个/组),按不同的方法处理单细胞(纯水法、冻融法、碱法),而后行巢式PCR扩增牙釉质基因.结果纯水法、冻融法、碱法处理后,扩增率分别为83%、94%、95%.后两种处理方法的扩增效率明显高于纯水法(P＜0.01),通过检测正常男性单淋巴细胞基因型发现3种方法等位基因脱失率分别为24%、12%、4%,差异有显著性(P＜0.05).两个淋巴细胞或卵裂球的扩增率及等位基因脱失率与单细胞相比差异无显著性.结论提高植入前遗传学诊断的准确性主要取决于如何克服单细胞PCR的缺点,采用碱法裂解单细胞及取两个卵裂球进行检测可提高用于性别诊断的单细胞PCR技术准确性和敏感性.